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His标签蛋白纯化填料支持物为Ni‐IDA CL-6B琼脂糖凝胶，载量为20mg 6*His标签蛋白/ml填料。 Ni‐IDA 亲和层析介质是把IDA（亚氨基二乙酸）共价偶联到4 %交联的琼脂糖介质上，再通过IDA 的3 个结合位点螯合Ni2+制备而成，并提供了三个离子键结合部位高亲和地纯化含有多聚组氨酸标签的重组蛋白。Ni‐IDA 亲和层析介质的Ni2+脱落程度很低，并具有高吸附量及高稳定性，在多聚组氨酸标签的重组蛋白的纯化实验中有非常好的表现力。该系统在天然或变性条件下，对来源于各种表达系统（如杆状病毒，哺乳细胞，酵母以及细菌）中的His标签蛋白，均有很好的纯化效果。 本产品已螯合镍离子，可直接用可溶性蛋白的纯化，使用方便，快捷。填料可重复使用。 可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、液体、土壤等不同样本的蛋白提取试剂盒，包含用于非双向电泳和双向电泳等不同下游应用的试剂盒以及含去垢剂成分和不含去污剂成分的蛋白提取试剂盒，专用于蛋白质谱检测的试剂盒等总计300多种蛋白提取试剂盒可供选择。还可以提供针对动物、植物等不同样 本的细胞核、线粒体、溶酶体、叶绿体等不同细胞器的提取试剂盒。
保存温度
2-8℃
注意事项
避免冷冻。
有效期
一年
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
试剂准备
1.纯水
耗材准备
1.离心管
2.吸头
使用注意事项
1.样品中不能含有β-巯基乙醇、DTT和EDTA、EGTA等。
2.整个纯化过程中切忌凝胶脱水变干。
3.为提高纯化效率，首先确定Binding Buffer和Elution Buffer中咪唑的最jia使用浓度。必要时可以使用线性或梯度浓度的咪唑浓度，Binding Buffer的范围为0-10 mM，洗脱缓冲液的范围为10-500 mM来进行。并通过SDS-PAGE或Western Blotting来检测目的蛋白的纯度。
4.请使用高纯度的试剂配制缓冲液，并通过0.22 μm或者0.45 μm过滤器过滤。为避免柱子被堵塞，建议将裂解液进行离心，或者使用0.22 μm或者0.45 μm过滤器过滤。
5.柱再生时，保证每步洗完后都要用足够的去离子水冲洗至中性。
使用方法
填料参数：
填料体积： 10 ml
动态吸附量： 20 mg 6×His 标签蛋白（27 kD）/ml 介质
球形基质： 4 %交联度琼脂糖
平均粒径： 90 μm （45‐165 μm）
储存溶剂： 1× PBS（含20%乙醇）
天然条件下纯化多聚组氨酸标签蛋白
缓冲液配制
用于配制缓冲液的水和化学试剂必须是高纯度的，并建议使用前用0.45 μm 滤膜过滤一遍。
平衡缓冲液：50 mM NaH2PO4，300 mM NaCl，用NaOH 调pH 为8.0
洗涤缓冲液：50 mM NaH2PO4，300 mM NaCl，10 mM 咪唑，用NaOH 调pH 为8.0
洗脱缓冲液：50 mM NaH2PO4，300 mM NaCl，250 mM 咪唑，用NaOH 调pH 为8.0
组装层析柱
1． 将Ni-Agarose Resin填料混匀后加入层析柱，室温静置10分钟，待凝胶与溶液分层后，把底部的出液口打开，让乙醇通过重力作用缓慢流出。
2． 向装填好的柱中加入5倍柱体积的去离子水将乙醇冲洗干净后，再用10倍柱体积的Binding Buffer平衡柱子，平衡结束后即可上样。
可溶性蛋白的纯化
以下以可溶性蛋白纯化为例，使用时以实际样本为准。
1． 收集菌体后，每100 mg菌体（湿重）加入1-5 ml细菌裂解液（每1 ml 细菌抽提试剂中已加入10 μl 蛋白酶抑制剂混合物），超声裂解菌体。
2． 10000 rpm,4℃离心3分钟，收集上清中的可溶性蛋白。
3． 用Binding Buffer将菌体裂解液等倍稀释后负载上柱，流速为10倍柱体积/小时，收集流穿液。
4． 使用15倍柱体积的Binding Buffer冲洗柱子，洗去杂蛋白。
5． 使用适量Elution Buffer洗脱，收集洗脱峰。
6． 洗脱后，依次使用10倍柱体积的去离子水洗涤柱子，再用3倍柱体积的20%乙醇平衡（乙醇要将填料浸没），封柱后2-8℃保存。
柱再生
当填料使用多次后，结合效率会有所下降（表现为流速变慢或填料失去蓝绿色），可以用以下方法再生，提高填料的使用寿命和蛋白质的结合效率。
1． 使用2倍柱体积的6 M盐酸胍冲洗后，使用3倍柱体积的去离子水冲洗。
2． 使用1倍柱体积的2% SDS冲洗。
3． 依次使用1倍柱体积的25%、50%、75%和5倍柱体积的100 %乙醇冲洗，再依次使用1倍柱体积的75%、50%和25%的乙醇冲洗。
4． 使用1倍柱体积的去离子水冲洗。
5． 使用5倍柱体积含50 mM EDTA缓冲液（PH8.0）冲洗。
6． 使用3倍柱体积去离子水，3倍柱体积20%乙醇冲洗。
7． 置2-8°C保存。
8． 再次使用前，需首先使用10倍柱体积去离子水冲洗，然后使用5个柱体积的50 mM NiSO4再生，3个柱体积的Binding Buffer平衡。
9． 为了长时间的保存，介质应当2‐8 ℃保存在1× PBS（含20 % 乙醇）中。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
