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His标签蛋白纯化试剂盒提供全套试剂，适用于从各种样品中纯化带有6*His标签的蛋白。本试剂盒填料支持物为CL-6B琼脂糖凝胶，载量为20mg His标签蛋白/ml填料。 本试剂盒包含Ni-Agarose填料、亲和柱空柱以及可溶性His融合蛋白纯化所需的全部试剂（细菌裂解液、蛋白酶抑制剂混合物、结合缓冲液和洗脱缓冲液组分），使用方便。该镍柱纯化系统对6×His-tag蛋白具有显著特异吸附能力，能够高效一步纯化带有6个组氨酸亲和标签的蛋白。该系统具有4个Ni2+螯合位点，较只有3个螯合位点的Ni-IDA结合Ni2+ 更为牢固，有效防止纯化过程中Ni2+脱落且增强对His标签蛋白的结合能力，提高纯化效率。较高的基团密度，大大提高了蛋白载量。该系统在天然或变性条件下，对来源于各种表达系统（如杆状病毒，哺乳细胞，酵母以及细菌）中的His标签蛋白，均有很好的纯化效果。 本产品已螯合镍离子，可直接用可溶性蛋白的纯化，使用方便，快捷。使用pH为3-13的范围内都能有好的纯化效果, pH2和pH14的条件下也可以短期使用。填料可重复使用。 本试剂盒只适合于可溶性蛋白的纯化，如需纯化包涵体蛋白，请选择我公司的其他货号的包涵体蛋白纯化试剂盒。 可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、藻类、液体、土壤等各种不同样本的蛋白提取试剂盒。 可以提供针对细胞膜、核、胞质、线粒体、溶酶体、高尔基体、内质网、外泌体等细胞不同部位的蛋白提取试剂盒。 可以提供针对下游实验不同应用的试剂盒，例如用于Western Blotting和双向电泳等不同下游应用的试剂盒；含去垢剂成分和不含去污剂成分的蛋白提取试剂盒；专用于蛋白质谱检测、Pull-down实验的试剂盒等总计300多种蛋白提取试剂盒供选择使用。 可以提供针对动物、植物等不同样本的细胞核、线粒体、溶酶体、叶绿体、外泌体等不同细胞器的提取试剂盒。 可以提供蛋白浓缩、脱盐、沉淀、透析、定量、电泳、纯化、检测等不同蛋白样品处理检测等相关试剂盒。
保存温度
2-8℃
注意事项
1.蛋白酶抑制剂-20℃保存；
2.其他2-8℃保存；避免冷冻。
有效期
一年
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
试剂准备
纯水
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
1.在纯化之前采用电泳检测蛋白的可溶性，本试剂盒只适合于可溶性蛋白的纯化，如需纯化包涵体蛋白，请选择我公司的其他货号的包涵体蛋白纯化试剂盒。
2.样品中不能含有β-巯基乙醇、DTT和EDTA、EGTA等。
3.整个纯化过程中切忌凝胶脱水变干。
4.为提高纯化效率，首先确定Binding Buffer和Elution Buffer中咪唑的最jia使用浓度。必要时可以使用线性或梯度浓度的咪唑浓度，Binding Buffer的范围为0-10 mM，洗脱缓冲液的范围为10-500 mM来进行。并通过SDS-PAGE或Western Blotting来检测目的蛋白的纯度。
5.请使用高纯度的试剂配制缓冲液，并通过0.22 μm或者0.45 μm过滤器过滤。为避免柱子被堵塞，建议将裂解液进行离心，或者使用0.22 μm或者0.45 μm过滤器过滤。
6.柱再生时，保证每步洗完后都要用足够的去离子水冲洗至中性。
7.蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
使用方法
缓冲液的准备
可溶性蛋白纯化缓冲液配方：
Component Tris-HCl（pH7.9） Imidazole NaCl
Binding Buffer 20 mM 10 mM 0.5 M
Elution Buffer 20 mM 500 mM 0.5 M
组装层析柱
1． 将Ni-Agarose Resin填料混匀后加入层析柱，室温静置10分钟，待凝胶与溶液分层后，把底部的出液口打开，让乙醇通过重力作用缓慢流出。
2． 向装填好的柱中加入5倍柱体积的去离子水将乙醇冲洗干净后，再用10倍柱体积的Binding Buffer平衡柱子，平衡结束后即可上样。
可溶性蛋白的纯化
1． 收集菌体后，每100 mg菌体（湿重）加入1-5 ml细菌裂解液（每1 ml 细菌抽提试剂中已加入10 μl 蛋白酶抑制剂混合物），超声裂解菌体。
2． 10000 rpm,4℃离心3分钟，收集上清中的可溶性蛋白。
3． 用Binding Buffer将菌体裂解液等倍稀释后负载上柱，流速为10倍柱体积/小时，收集流穿液。
4． 使用15倍柱体积的Binding Buffer冲洗柱子，洗去杂蛋白。
5． 使用适量Elution Buffer洗脱，收集洗脱峰。
6． 洗脱后，依次使用10倍柱体积的去离子水洗涤柱子，再用3倍柱体积的20%乙醇平衡（乙醇要将填料浸没），封柱后2-8℃保存。
柱再生
当填料使用多次后，结合效率会有所下降（表现为流速变慢或填料失去蓝绿色），可以用以下方法再生，提高填料的使用寿命和蛋白质的结合效率。
1． 使用2倍柱体积的6 M盐酸胍冲洗后，使用3倍柱体积的去离子水冲洗。
2． 使用1倍柱体积的2% SDS冲洗。
3． 依次使用1倍柱体积的25%、50%、75%和5倍柱体积的100 %乙醇冲洗，再依次使用1倍柱体积的75%、50%和25%的乙醇冲洗。
4． 使用1倍柱体积的去离子水冲洗。
5． 使用5倍柱体积含50 mM EDTA缓冲液（PH8.0）冲洗。
6． 使用3倍柱体积去离子水，3倍柱体积20%乙醇冲洗。
7． 置2-8°C保存。
8． 再次使用前，需首先使用10倍柱体积去离子水冲洗，然后使用5个柱体积的50 mM NiSO4再生，3个柱体积的Binding Buffer平衡。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
