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动物跨膜蛋白承担各种生物功能，在疾病的发生、发展过程中扮演重要角色。膜蛋白样品的制备需要充分考虑到与下游的胶分析及质谱分析等应用配套，因此膜蛋白样本制备成为一个难以逾越的挑战。 膜蛋白提取试剂盒是一种快速高效的高产膜蛋白提取试剂盒。本试剂盒提供全套试剂，适用于从动物细胞和动物组织提取总膜蛋白。提取过程简单方便，可在1小时内完成。提取的膜蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。 本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解细胞膜组份，包括细胞质膜、核膜和各种细胞器膜。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。 本试剂盒的蛋白提取组份中不含有不可透析除去的去垢剂组份，不含SDS、Triton X-100、chaps等可能影响质谱实验的组份，基本可以满足下游任意的蛋白质组学相关实验研究。 本产品的蛋白酶抑制剂混合物中不含AEBSF，可以避免由于AEBSF导致的质谱峰漂移，因此使用本产品提取的蛋白样品可以用于质谱(Mass Spectrometry, MS)检测和分析，蛋白质组学(proteomics)等相关研究。 本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。
保存温度
2-8℃
注意事项
1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
检测方法
质谱分析
适用样本
动物细胞/组织
产品特点
1.使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
2.提取过程简单方便，将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。
3.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
4.紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
5.总蛋白提取液含多种有效成分，可以充分释放胞浆蛋白、核蛋白和膜蛋白，又可结合释出的蛋白防止沉淀。
6.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含5种独立的蛋白酶抑制剂Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
产品应用
质谱分析
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
2.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项：
旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
提取液A在使用前须一直置于2-8℃条件，否则下游膜蛋白提取时会导致不容易分层。
膜蛋白电泳时loading buffer应该避免煮沸。
膜蛋白电泳时可以提高loading buffer的SDS含量。
可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
使用方法
细胞蛋白提取
1. 提取液准备：
每500μl冷的蛋白提取液A中加入2μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
每500μl膜蛋白溶解液C中加入2μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取5-10×106个以上细胞，在4℃，500g条件下离心3-5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
3. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 细胞样品中加入400μl冷的试剂 A，充分混匀。
5. 在2-8℃条件下振荡20-30分钟，至细胞充分裂解，细胞沉淀明显减少。
6. 在4℃，12000×g条件下离心5分钟。
7. 将上清吸入另一干净离心管，在37℃水浴10分钟。
8. 在37℃，1000g力离心5分钟，此时溶液分为两层，下层是膜蛋白约为50μl。
9. 小心移除上层液体，收集上层部分留作备用分析。
10. 用850μl冷的试剂C膜蛋白溶解液溶解下层膜蛋白部分，即得膜蛋白粗提液。
11. 在900μl膜蛋白粗提液样本中加入100μl试剂E，充分混匀。
12. 冰浴或4℃冰箱静置30分钟以上。
13. 在4℃，15000×g以上条件下离心15分钟。
14. 小心移除上层清液丢弃，留沉淀。
15. 将离心管倒置在吸水纸上干燥离心管。
16. 加入200μl试剂F到离心管中。
17. 在4℃，15000×g以上条件下离心15分钟。弃上清，留沉淀。
18. 将离心管倒置在吸水纸上干燥离心管。
19. 用40－100μl试剂G溶解蛋白沉淀，充分混匀。
20. 在4℃，10000×g条件下离心10分钟。
21. 收集上清用于下游实验。
22. 将蛋白样品透析处理或者脱盐柱脱盐处理后用于下游实验。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
