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线粒体(mitochondria)是真核细胞中产生能量的重要细胞器。细胞中的能源物质—脂肪、糖、部分氨基酸在此进行最终的氧化，并通过偶联磷酸化生成ATP，供给细胞生理活动之需。对线粒体结构与功能的研究通常是在离体的线粒体上进行的。 酵母线粒体蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种酵母样品中提取线粒体。提取过程简单方便。 本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白，下游应用范围广，提取液裂解细胞的能力较温和，需要根据实际样本情况优化裂解时间。 本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。
保存温度
2-8℃
注意事项
1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
检测方法
WB,IP等
适用样本
酵母
产品应用
WB,IP等
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
2.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项：
? 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
? 蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
? 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
? 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
? 如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
? 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
使用方法
1. 提取液准备：
每500ul冷的酵母线粒体蛋白提取液D中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 酵母培养物，在4℃，1000×g条件下离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集酵母沉淀。
3. 用PBS洗涤酵母两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 每100-200ul体积或100-200mg湿重酵母沉淀物中加入400ul酵母线粒体提取液A，混匀后，在30℃条件下保温15分钟。
5. 在1000×g条件下离心5-10分钟，收集酵母沉淀。
6. 酵母沉淀物中加入500ul酵母线粒体提取液B，充分混匀后。
7. 在37℃或室温条件下轻微振荡60-90分钟。
8. 在2000g条件下离心5-10分钟，弃上清，收集沉淀。
9. 沉淀用PBS洗涤两次。离心收集沉淀。
10. 在沉淀中加入800μl酵母线粒体提取液 C，充分混匀，然后在振荡器上振荡15-30分钟。
11. 在4℃，500×g条件下离心5分钟，弃沉淀，收集上清。
12. 将上清在4℃，2000×g条件下离心5分钟，弃沉淀，收集上清。
13. 将上清在4℃，14000×g条件下离心20分钟。弃上清，收集沉淀。
14. 在沉淀中加入200-300μl线粒体蛋白提取液D，充分混匀。
15. 在4℃条件下振荡20-30分钟。
16. 在4℃，14000×g条件下离心15分钟。
17. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到酵母线粒体总蛋白。
18. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
