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高尔基体蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种动物细胞和实体软、硬组织样本的高尔基体提取。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。 高尔基体（Golgi apparatus, Golgi bodies）是由许多扁平的囊泡构成的以分泌为主要功能的细胞器。又称高尔基器或高尔基复合体；高尔基体是由数个扁平囊泡堆在一起形成的高度有极性的细胞器。常分布于内质网与细胞膜之间，呈弓形或半球形，凸出的一面对着内质网称为形成面（forming face）或顺面（cis face）。凹进的一面对着质膜称为成熟面（mature face）或反面（trans face）。顺面和反面都有一些或大或小的运输小泡，在具有极性的细胞中，高尔基体常大量分布于分泌端的细胞质中。因其看上极像滑面内质网，因此有科学家认为它是由滑面内质网进化而来的。 高尔基体中的酶主要有糖基转移酶、磺基-糖基转移酶、氧化还原酶、磷酸酶、蛋白激酶、甘露糖苷酶、转移酶和磷脂酶等不同的类型。高尔基体的主要功能将内质网合成的蛋白质进行加工、对比分类、与包装，然后分门别类地送到细胞特定的部位或分泌到细胞外。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。 本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。
保存温度
2-8℃
注意事项
1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
检测方法
WB,IP等
适用样本
动物细胞/组织
产品应用
WB,IP等
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
2.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项：
旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
下游实验如果是进行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性检测，提取液可以不加蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂，注意提取过程保持低温操作，缩短离心时间。
使用方法
细胞高尔基体提取：
1. 提取液准备：
每500 μl冷的蛋白提取液D中加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取1-2×107个细胞，在4℃，500×g条件下离心2-3分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
3. 用冷PBS洗涤两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 加入400μl冷的试剂 A，置冰上10分钟。
5. 用Dounce匀浆器充分匀浆几分钟，然后在4℃，1000×g力条件下离心5分钟。
6. 弃沉淀，将上清吸入另一预冷的干净离心管。
7. 在4℃，3000×g力条件下离心10分钟。
8. 弃沉淀，将上清吸入另一预冷的干净离心管。
9. 在上清中加入10 μl试剂WT，在4℃，20000×g力条件下离心20分钟。
10. 弃上清，在沉淀中加入500μl冷的试剂B，混匀。
11. 在4℃，20000×g力条件下离心30分钟。弃上清，收集沉淀。
12. 在沉淀中加入100-300 μl蛋白提取液D，吹打混匀后，在4℃条件下振荡15-20分钟，至沉淀充分裂解，无明显沉淀。
13. 在4℃，12000×g条件下离心15分钟。
14. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到高尔基体蛋白样品。
15. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
组织高尔基体提取：
1. 提取液准备：
每500 μl冷的蛋白提取液D中加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取50-100mg新鲜动物组织样本，用PBS洗涤干净。
3. 用剪刀尽可能剪碎，用冷PBS洗涤两次。
4. 加入400μl冷的试剂 A，置冰上10分钟。
5. 用Dounce匀浆器充分匀浆几分钟，然后在4℃，1000×g力条件下离心5分钟。
6. 弃沉淀，将上清吸入另一预冷的干净离心管。
7. 在4℃，3000×g力条件下离心10分钟。
8. 弃沉淀，将上清吸入另一预冷的干净离心管。
9. 在上清中加入10 μl试剂WT，在4℃，20000×g力条件下离心20分钟。
10. 弃上清，在沉淀中加入500μl冷的试剂B，混匀。
11. 在4℃，20000×g力条件下离心30分钟。弃上清，收集沉淀。
12. 弃上清，沉淀用高尔基体保存液重悬。
13. 在沉淀中加入100-300 μl蛋白提取液D，吹打混匀后，在4℃条件下振荡15-20分钟，至沉淀充分裂解，无明显沉淀。
14. 在4℃，12000×g条件下离心15分钟。
15. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到高尔基体蛋白样品。
16. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
