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获取电话产品概述
核膜蛋白与核内蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种原代或传代动物细胞和各种动物实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等动物组织中提取核膜蛋白和核内蛋白，包括组蛋白核非组蛋白。提取过程简单方便，可在1小时内完成。制备的核膜蛋白和核内蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。 本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解细胞核膜组份。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活性测定等蛋白研究。 本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。
保存温度
2-8℃
注意事项
1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
检测方法
WB,IP等
适用样本
动物细胞/组织
产品特点
1.使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
2.提取过程简单方便。
3.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
4.紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
5.蛋白提取液含多种有效成分，可以充分释放胞浆蛋白和膜蛋白，又可结合释出的蛋白防止沉淀。
6.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
产品应用
WB,IP等
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.匀浆机/匀浆器
4.涡旋混匀器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
2.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项：
? 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
? 蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
? 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
? 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
? 如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
? 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
? 下游实验如果是进行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性检测，提取液可以不加蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂，注意提取过程保持低温操作，缩短离心时间。
使用方法
细胞蛋白提取
1. 提取液制备：
每300ul冷的蛋白提取液B中加入1ul蛋白酶抑制剂混合物和1ul磷酸酶抑制剂，混匀后置冰上备用。
每300ul冷的膜蛋白溶解液C中加入1ul蛋白酶抑制剂混合物和1ul磷酸酶抑制剂，混匀后置冰上备用。
2. 取5-10×106个细胞，在4℃，500×g力条件下离心2-3分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
3. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 每20ul体积细胞沉淀（约20mg，2×106个细胞）中加入100-200μl冷的提取液 A，高速涡旋混匀或吹打混匀，置2-8℃条件振荡15-30分钟。
5. 再次高速涡旋振荡混匀，然后在4℃，10000×g条件下离心5分钟。
6. 弃上清，收集沉淀。
7. 沉淀用PBS洗涤一次，然后在4℃，10000×g条件下离心5分钟，弃上清。
8. 在沉淀中加入100-200μl冷的提取液B，高速涡旋混匀15秒。置2-8℃条件振荡30分钟-2小时。
9. 置37℃水浴10分钟。然后在37℃ 500-1000g力离心2分钟。
10. 此时溶液分为两层，小心移除上层，即为核内蛋白。
11. 留下管底部下层大约20-30ul液体。
12. 用30-100ul膜蛋白溶解液C溶解该溶液，即得核膜蛋白样品。
13. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
组织蛋白提取
1. 提取液制备：
每300ul冷的蛋白提取液B中加入1ul蛋白酶抑制剂混合物和1ul磷酸酶抑制剂，混匀后置冰上备用。
每300ul冷的膜蛋白溶解液C中加入1ul蛋白酶抑制剂混合物和1ul磷酸酶抑制剂，混匀后置冰上备用。
2. 取适量组织样本用剪刀剪碎，加冷PBS，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体。
3. 匀浆液在4℃，500×g力条件下离心2-3分钟，弃上清。
4. 每20ul体积细胞沉淀（约20mg，2×106个细胞）中加入100-200μl冷的提取液 A，高速涡旋混匀或吹打混匀，置2-8℃条件振荡15-30分钟。
5. 再次高速涡旋振荡混匀，然后在4℃，10000×g条件下离心5分钟。
6. 弃上清，收集沉淀。
7. 沉淀用PBS洗涤一次，然后在4℃，10000g条件下离心5分钟，弃上清。
8. 在沉淀中加入100-200μl冷的提取液B，高速涡旋混匀15秒。置2-8℃条件振荡30分钟-2小时。
9. 置37℃水浴10分钟。然后在37℃ 500-1000×g力离心2分钟。
10. 此时溶液分为两层，小心移除上层，即为核内蛋白。
11. 留下管底部下层大约20-30ul液体。
12. 用30-100ul膜蛋白溶解液C溶解该溶液，即得核膜蛋白样品。
13. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
