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获取电话产品概述
细胞膜蛋白/胞浆蛋白/核膜蛋白提取试剂盒适用于从各种原代或传代细胞和各种实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等动物组织中分步提取细胞膜蛋白/胞浆蛋白/细胞核膜蛋白/核内蛋白。提取过程简单方便，可在1小时内完成。 本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解细胞膜组份，包括细胞质膜、核膜和各种细胞器膜。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。 本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。
保存温度
2-8℃
注意事项
1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
检测方法
WB,IP,co-IP,ELISA,EMSA等
适用样本
动物细胞
产品特点
1.使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
2.将蛋白提取的时间缩短至1小时。
3.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
4.紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
5.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
产品应用
WB,IP,co-IP,ELISA,EMSA等
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.匀浆机/匀浆器
4.涡旋混匀器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
2.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项：
旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
提取液B在使用前须一直置于2-8℃条件，否则下游膜蛋白提取时会导致不容易分层。
膜蛋白电泳时loading buffer应该避免煮沸。
膜蛋白电泳时可以提高loading buffer的SDS含量。
使用方法
1. 提取液制备：
每400 μl冷的蛋白提取液A/B/D中都分别加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物和2 μl磷酸酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取5-10×106个细胞，在4℃，800×g条件下离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干。
3. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 每5×106个细胞中加入400 μl冷的蛋白提取液A，混匀后，在4℃条件下用试剂盒所配针筒反复吸吹细胞，使细胞完全破裂。
5. 在4℃，1000×g条件下离心5分钟。
6. 将上清（I）吸入另一干净离心管，在沉淀中加入100-200 μl冷的提取液B，高速涡旋振荡15秒，充分混匀。
7. 将混匀的提取液B置4℃低速振荡30-60分钟。
8. 将提取液B在37℃条件下水浴10分钟。
9. 将提取液B在37℃下1000×g -2000×g力离心5分钟，此时溶液分为两层（对着光线看），上层为核内蛋白，下层是核膜蛋白约为20-40 μl。小心移除上层，用1-2倍体积的冰冷的提取液D溶解下层即为细胞核膜蛋白。
10. 在步骤6中所得到的上清（I）中加入5 μl提取液C，充分混匀。
11. 在2-8℃振荡20-30分钟。
12. 在37℃水浴10分钟。
13. 在37℃下 1000×g离心3分钟，此时溶液分为两层，上层是胞浆蛋白部分，下层部分（II）是细胞膜蛋白约为40-50 μl。
14. 将上层小心吸入另一预冷的干净离心管，即可得到胞浆蛋白。
15. 用50-150 μl冰冷的提取液D溶解步骤13中的下层部分（II），即得细胞膜蛋白。
16. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
