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细胞内pH（Intracellular pH，pHi）是酶活性和细胞功能的重要生理决定因素，所有蛋白质都依赖于严格调节的pH值以维持其结构和功能。质子 - 去质子化可以指示生物表面的电荷，并且是许多代谢反应中的组成部分。此外，跨线粒体膜的质子梯度用于产生细胞能量并支持其他线粒体过程。因此，细胞已经开发出多种机制来保持pHi的窄范围，以响应pH值的细胞内和细胞外波动。 细胞内pH值检测试剂盒采用P01细胞内pH值荧光探针检测胞内pH值的变化。P01是pH敏感的荧光染料，其在碱性条件下荧光强更高，反之酸性条件下变低，从而P01可被用于监测细胞内pH变化，见图一。 P01是一种可以穿透细胞膜的荧光染料，P01本身没有荧光，穿透细胞膜进入细胞后被细胞内的酯酶剪切形成荧光物质，从而被滞留在细胞内。产生的荧光物质最da激发波长为 502nm，最da发射波长为 528nm，其在不同的pH值条件下发射的荧光强度不同，从而可以反映细胞内pH值得变化情况。P01主要用于哺乳动物细胞的研究，也可用于其他动物组织、植物细胞、酵母等的细胞内pH水平检测。在有细胞内pH变化的细胞毒性、细胞凋亡、细胞粘附、药物抵抗、细胞趋化等过程中也可应用。实际检测时推荐使用的激发波长为488nm左右，发射波长为 525～540nm。可以使用激光共聚焦显微镜或流式细胞仪检测细胞内pH值的变化。 本试剂盒内P01探针母液500-5000倍稀释后使用，一般1000-2000倍稀释使用即可，按每个样500ul计算，50ul母液至少可以做100-200个样品。 本试剂盒主要用于细胞内pH值变化的定性检测。但是在一定pH值范围内荧光强度与细胞内pH有良好的线性关系，据此可以用特定的pH值的标准缓冲液制备标准曲线，从而可以换算出细胞内的pH值的具体数据。
保存温度
2-8℃ 避光
注意事项
1.探针长期不用可以-20℃保存。避免反复冻融。
2.探针A为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
4.P01探针容易受潮，受潮后稳定性较差，注意干燥保存。
5.吸取P01探针母液时要用干燥的新吸头，不能使用含水的吸头。
6.未使用完的P01探针母液请拧紧螺旋盖，避免受潮失效。
有效期
6个月
检测方法
流式细胞仪//激光共聚焦/荧光显微镜
适用样本
细胞
产品应用
流式细胞仪/激光共聚焦/荧光显微镜
仪器准备
1.流式细胞仪或激光共聚焦或荧光显微镜
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液 2.HBSS 3. HEPES 4.（备选）Nigericin sodium salt
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。
2.pH探针为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
3.P01探针容易受潮，受潮后稳定性较差，注意干燥保存。
4.吸取P01探针母液时要用干燥的新吸头，不能使用含水的吸头。
5.未使用完的P01探针母液请拧紧螺旋盖，避免受潮失效。
6.P01探针工作液含水，配制后不可以长期保存，须现配现用。
7.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
8.标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定最jia条件。以下方法仅供参考。
9.荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
10.染色后立即进行分析。
11.可以在染色溶液中加入等体积的20% Pluronic F127溶液，Pluronic F127 可以帮助P01更快进入细胞，不建议在Pluronic F127中长期保存P01溶液。
12.本试剂盒主要用于细胞内pH值变化的定性检测。但是在一定pH值范围内荧光强度与细胞内pH有良好的线性关系，据此可以用特定的pH值的标准缓冲液制备标准曲线，从而可以换算出细胞内的pH值的具体数据。
使用方法
1. 染色工作液的配制：
根据样品数，用探针稀释液将P01探针进行10倍稀释， 然后再用HBSS缓冲液稀释P01溶液20倍-200倍，配制成P01染色工作液。
2. 将P01染色工作液加入已处理好的细胞，在37℃孵育30-60 分钟。
3. 用PBS或HBSS洗涤细胞2-3次。用HBSS重悬细胞。
4. 然后用该细胞进行荧光细胞内pH变化情况检测。
激发波长 488-506nm，发射波长526-536nm。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
