产品概述
酸性磷酸酶(ACP)检测试剂盒检测原理是酸性磷酸酶(ACP)水解磷酸苯二钠,产生酚和无机磷,经碱处理后酚能与4-AAP反应,产物经氧化生成红色醌类化合物。红色越多,说明酸性磷酸酶活性越高,反之则酶活性越低,通过分光光度比色法测定510nm处吸光度,据此通过比色分析就可以计算出酸性磷酸酶活性水平。 本试剂盒主要用于检测血清中前列腺酸性磷酸酶活性,也可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液等样品中内源性的酸性磷酸酯酶活性。 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。 可以为您提供各种颜色的M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品,以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。
保存温度
2-8℃ 避光
注意事项
开盖后组份按要求条件保存。
有效期
6个月
检测方法
分光光度计
适用样本
血清血浆/组织/细胞
产品应用
分光光度计
仪器准备
1.分光光度计
2.恒温水浴锅
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.比色皿
6.冰盒
试剂准备
1.纯水
耗材准备
1.试管
2.吸头
3.离心管
使用注意事项
1.待测样品中不能含有磷酸酶抑制剂,同时需避免反复冻融。
2.建议每次测定时都做标准曲线,以使标准更准确,另外标准品需避免反复冻融。
3.可以使用酶标仪,也可以使用普通的分光光度计测定。
4.所测样本的值高于标准曲线的上限,应用ACP检测液稀释样品后重新测定。
5.待测样品中酸性磷酸酶活性较低时,可适当延长孵育时间至30min。
使用方法
一、准备样品:
1、 血浆、血清和尿液样品:血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定,尿液通常也可以直接用于测定,-20℃冻存,用于酸性磷酸酯酶的检测。
2、 细胞或组织样品:取恰当细胞或组织裂解液,如果有必要可用PBS或生理盐水进行适当匀浆(一般细胞数量在106以上,组织应在100mg以上),低速3000-4000g离心取上清,-20℃冻存,用于酸性磷酸酯酶的检测。
3、 高活性样品:如果样品中含有较高活性的酸性磷酸酶,可以使用原有的裂解液或PBS等进行稀释,也可以采用试剂C:ACP 检测液稀释。
4、 植物样本:取适量的植物组织加入少量生理盐水或PBS,充分捣碎或研磨,静置30min,用纱布或滤纸过滤,4000g离心20min,取上清并测量体积,-20℃冻存,用于酸性磷酸酯酶的检测。
二、标准品准备:
取适量的试剂A苯酚(10mM)和蒸馏水,按下表稀释成0、0.1mM、0.2mM、0.3mM、0.4mM、0.5mM。
三、ACP加样
按照下表设置空白管、标准管、测定管,溶液应按照顺序依次加入,并注意避免产生气泡。
如果样品中的酸性磷酸酯酶活性过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。样品的检测最hao能设置2平行管,求平均值。
分光光度计测定510nm吸光度。
以空白孔调零,读取标准孔和各待测孔的吸光度。
酶标仪检测时上表中试剂等比例调整即可。
一般应在数小时检测完毕。
四、计算
ACP活性单位的定义:
在该实验条件下,每分钟每ml酶液产生1nmol酚(nmol/ml•min)为一个活性单位。
标准曲线绘制:
以各标准管吸光度值为纵坐标,相应的酚含量为横坐标绘制酚含量-吸光度值曲线,即为标准曲线。
计算:
根据测得的各待测样品的吸光度,于标准曲线上查出相应的酚含量,乘以稀释倍数后,换算为”nmol/ml•min”的活性单位。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!