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总SOD检测试剂盒采用黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase）活力， 通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子自由基（O2-），后者氧化羟胺形成亚硝酸盐，在显色剂的作用下呈现紫红色，用可见分光光度计测其吸光度。当被测样品中含SOD时，则对超氧阴离子自由基有专一性的抑制作用，使形成的亚硝酸盐减少，比色时测定管的吸光度值低于对照管的吸光度值，通过公式计算可求出被测样品中的SOD活力。 高等动物细胞内只有二种SOD即铜锌-SOD（CuZn-SOD）与锰-SOD（Mn-SOD），低等动物、单细胞生物及植物中除了铜锌-SOD（CuZn-SOD）与锰-SOD（Mn-SOD），还有铁-SOD（Fe-SOD）。通过测定T-SOD、Mn-SOD、CuZn-SOD、Fe-SOD，可以计算出各分型SOD的活力。 本试剂盒可测血清、血浆、脑脊液、胸水、腹水、肾透析液、尿液、红细胞、白细胞、血小板、心肌培养细胞、肿瘤培养细胞、各种动植物组织细胞及亚细胞水平（线粒体、微粒体）中的总SOD活力，并可用于微生物、药物、食品、饮料、化妆品研发过程中的总SOD活力检测。 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。
保存温度
2-8℃ 避光
注意事项
开盖后组份按要求条件保存。
有效期
6个月
检测方法
分光光度计
适用样本
血清血浆/组织/细胞
产品特点
1.快速：整个操作过程约50分钟。
2.取样量极微：本法取手指或耳垂等末稍血20μl-50μl即可测红细胞中的SOD，只需2ml静脉血可测白细胞中的SOD及血小板中SOD，只需6mg组织就可测组织血浆、胞浆、0.2g组织可测线粒体及微粒中的SOD。
3.灵敏度高：ID50=0.05g/ml是邻苯三酚法灵敏度的18倍，因而可测定心肌灌流液、脑脊液、胸腹水、肾透析液、心肌培养细胞、肿瘤培养细胞中的SOD，此法最灵敏。
4.稳定性好：试剂放在0℃-4℃冰箱中可保存6个月。取混合血清放在4℃冰箱中，三天内SOD活力不变。
5.再现性好：变异系数CV=1.7%，同一份标本这次测得结果与几天后测得结果相差无几。
6.受外界影响因素小，优于其它各种化学检测法，优于放免法。
7.测试面广：即可测T-SOD又可测得Mn-SOD也可测得CuZn-SOD，本法测试各种动物红细胞、白细胞、血小板、血清（浆）、心肌组织、肺、肝、肾、脾、耳膜、肾上腺等几十种组织匀浆、线粒体、微粒体、离体心肌灌流液、肾透析液、腹水、胸水、脑脊液、心肌培养细胞、肿瘤培养细胞等，效果均很佳。
8.不需要昂贵或特殊的仪器，只需恒温水浴箱与721、722、751、752等可见分光光度计。用简单的仪器测出高水平的指标。
产品应用
分光光度计
仪器准备
1.分光光度计（酶标仪）
2.恒温水浴锅
3.离心机
4.移液器
5.冰盒
试剂准备
1.PBS
2.冰醋酸
3.纯水
耗材准备
1.试管
2.吸头
使用注意事项
1.试管要洗干净，在测微量样品时，例如心肌培养细胞、肿瘤培养细胞、白细胞、血小板、线粒体、微粒体或离体心肌灌流液等尤为重要。
2.所有试剂的配制均应在测试前一天进行，目的使其充分溶解。配好后的试剂，4℃可以保存3-6个月，测试前从冷藏箱中拿出的试剂及样品要在室温中放30分钟后再用。
3.为避免测试误差，第yi次吸的试剂要丢掉，用作冲洗管道，吸嘴外周若挂有液体要用滤纸轻轻擦干，样品和试剂要垂直加入试管，不要加在管壁上(因试剂及样品量小)。水浴前要用旋涡混匀器充分混匀。
4.每次水浴时间为40分钟，（当室温低于20℃时水浴时间适当延长至45分钟）水浴温度37℃要固定。
5.对照管要做2支，并且放在所有测试管的中间做，取其平均值。或每9支测定管做一支对照管。
6.同一份标本测总SOD与Mn-SOD或者是测总SOD与CuZn-SOD时，只需测其中一对即可以。因为总SOD减去Mn-SOD等于CuZn-SOD；总SOD减去CuZn-SOD等于Mn-SOD。
7.测试前先预试以确定最jia取样量：当您第yi次使用本试剂盒测试某一种新的组织样品时最hao先做三只不同取样量的测试管。例如想测1%脑组织匀浆，取样量分别为10μl、30μl、50μl，然后计算结果应在0.15-0.55之间，即百分抑制率在15-55%之间，然后取百分抑制率在45%或48%左右的一管作为最jia取样量，因为酶的百分抑制率与酶的活力呈抛物线关系，若百分抑制率大于60%时，则需将样本浓度稀释或减少上样量再测试。若百分抑制率小于20%时，则需将样品量加大后再测试。
8.本试剂盒亦可用酶标仪读数（可在反应完后取200ul加进96孔板，于550nm处读数，计算时所有OD值减去空白板OD值代入公式计算即可）
使用方法
试剂配制
1. 试剂A：
试剂A工作液的配制：用时每瓶5ml储备液加蒸馏水稀释至50ml，4℃保存一年。
2. 试剂D：贮备液 -20℃保存。
用时和试剂D稀释液按1：14稀释，即为试剂D工作液，最hao现配现用。
配好的试剂D工作液2-8℃保存，不可冷冻。
3. 试剂E：
用时加70℃-80℃双蒸水37.5ml溶解后备用，若加热过程中水分蒸发减少，此时必须用蒸馏水补水至37.5ml，配好后的试剂避光4℃冷藏6个月。
4. 试剂F：
用时加蒸馏水37.5ml溶解后备用，配好后试剂避光4℃冷藏6个月。
5. 显色剂的配制：按照试剂E：试剂F：冰乙酸=3：3：2的体积比配成显色剂，最hao现配现用。配好后显色剂4℃避光冷藏3个月。
样本处理：
1. 组织匀浆的制备：
准确称取组织重量，按重量（g）：体积（ml）=1:9的比例，加入9倍体积的匀浆介质（推荐0.86%或0.9%的生理盐水），冰浴，机械匀浆，制备成10%的匀浆液，2500-3000转/分，离心10min，取上清待测。
取得的上清液根据不同组织，再用匀浆介质稀释成不同浓度，进行最jia取样量的摸索，确定好最jia取样量后按下表进行正式实验。
2. 植物组织的前处理：
准确称取植物组织重量，按重量（g）：体积（ml）=1:4的比例，加入4倍体积的匀浆介质（推荐0.1mol/L pH7.0-7.4磷酸盐缓冲液），冰浴，机械匀浆制备成20%的匀浆液，3500-4000转/分，离心10min，取上清待测。
取得的上清液根据不同组织，再用匀浆介质稀释成不同浓度，进行最jia取样量的摸索，确定好最jia取样量后按下表进行正式实验.
3. 高脂血症血清（浆）样本的前处理：
轻度高脂血症：外观略有混浊，血清测试前只需加等量的生理盐水稀释即可；
中度高脂血症：外观混浊较明显，血清测试前需加等量的生理盐水稀释，再加血清1/2量的无水乙醇混匀即可；
重度高脂血症：取50ul高脂血清（浆）加生理盐水200ul混匀后，加无水乙醇150ul充分混匀1min，再加入三氯甲烷150ul，充分混匀1min，3500转/分，离心10min，取上清待测
4. 红细胞抽提液的制作：
① 采集新鲜血或肝素抗凝的静脉血或动脉血50ul，加入盛有1-2ml生理盐水的带刻度的离心管中，500-1000转/分，离心10min；
② 用移液器也可用针筒接上麻醉针头吸去上清液（吸净），留沉淀的红细胞；
③ 在红细胞中加入冷双蒸水0.2ml，混匀（使红细胞充分溶解，将溶血液对光观察看是否呈现透明状，则表示充分溶解）；
④ 加入95%乙醇0.1ml，振荡30秒；
⑤ 加入三氯甲烷0.1ml置漩涡混匀器充分抽提混匀1min；
⑥ 3500转/分离心8min。此时液体分三层：上层为SOD抽提液，中层为血红蛋白沉淀物，下层为三氯甲烷。若上清有混浊可加入少量固体NaCl后再离心5min，即可澄清。记录上清液体积，取5-20ul进行最jia取样量的摸索。（剩余的红细胞抽提液可放冰箱冷冻备用）
结果计算：
（一）血清（浆）、心肌灌流液、肾透析液、细胞培养液等总SOD活力计算：
1. SOD活性单位定义：
每毫升反应液中SOD抑制率达50%时所对应的SOD量为一个SOD活力单位（U）。
2. 总SOD活力计算公式：
（1）血清（浆）、心肌灌流液、肾透析液、细胞培养液等总SOD活力计算公式：
SOD活力（U/ml）=（对照吸光度-测定吸光度）÷对照管吸光度÷50%×反应体系稀释倍数×样品测试前稀释倍数
（2）高脂血症血清（浆）中总SOD活力计算公式：
SOD活力（U/ml）=（对照吸光度-测定吸光度）÷对照管吸光度÷50%×反应体系稀释倍数×样品测试前稀释倍数
反应体系稀释倍数= 反应液总量 = 试剂量 3.3ml + 反应体系中的取样量
取样量 反应体系中的取样量
重度高脂血症血清（浆）= 取样量50ul+生理盐水200ul+无水乙醇150ul=400ul
测试前的稀释倍数 取样量50ul 50ul
（二）组织匀浆中SOD活力计算：
1. SOD活性单位定义：
每毫克组织蛋白在1ml反应液中SOD抑制率达50%时所对应的SOD量为一个SOD活力单位（U）。
2. 计算公式：
SOD活力（U/mgprot）=（对照管吸光度-测定管吸光度）÷对照管吸光度÷50%×（反应液总体积÷取样量ml）÷样品中蛋白浓度（mgprot/ml）
（三）红细胞中总SOD活力计算：
1. SOD活性单位定义：
每克血红蛋白在1ml反应液中SOD抑制率达50%时所对应的SOD量为一个SOD活力单位（U）。
2. 红细胞中总SOD活力计算公式：
SOD活力（U/gHb）=（对照吸光度-测定吸光度）÷对照管吸光度÷50%×反应液体积×（抽提液总量÷测定抽提液量）x（1ml÷采血量）÷血红蛋白含量（gHb/ml）
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
