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活性氧(Reactive oxygen species, ROS) 包括过氧化氢（H2O2，Hydrogen peroxide）、羟基自由基（•OH，Hydroxyl radical）、单线态氧（1O2，Singlet oxygen）、一氧化氮（NO，Nitric oxide）、超氧阴离子(•O2-，Superoxide anion)、过氧化自由基(ROO• ，Peroxyl radical)、过氧羟自由基（HOO• ，hydroperoxyl）及其下游产物过氧化物过氧亚硝基阴离子（ONOO-，Peroxynitrite anion）、ClO-和羟化物等，参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。 活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生主要是氧化磷酸化的结果，在呼吸链中，在某些位点会有“泄露”的电子直接和氧气或和其他电子受体反应，在酶或非酶作用下引发一系列反应生成不同种类的活性氧：“泄露”的电子最初和氧气反应生成超氧阴离子自由基(O2•-)(图1A)。超氧阴离子遇水生成H2O2(图1B)，同时过氧化氢也可由氧气在单胺氧化酶(monoamine oxidase,MAO)的作用下生成(图1C)，生成的过氧化氢在髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)的催化下与Cl-反应可生成ClO-(图1D)，在铁或铜离子的催化下发生Fenton反应生成OH•(图1E)，超氧阴离子遇氮氧化物反应生成ONOO-(图1F)。这些生成的高氧化活性的物质统称为活性氧。 羟基自由基（•OH）检测试剂盒是一种利用羟基自由基（•OH）特异性深红色荧光探针O28进行羟基自由基检测的试剂盒。O28可自由透过活细胞膜进入细胞内，并被细胞内的羟基自由基（•OH）氧化，产生红色荧光产物。根据活细胞中红色荧光的产生，可以判断细胞羟基自由基（•OH）含量的多少和变化。用流式细胞仪或荧光显微镜可直接观察，是一种快速简便的组织或培养活细胞中羟基自由基（•OH）检测方法。 在激发波长560nm，发射波长575 nm附近，使用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、荧光分光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪等检测荧光，从而测定细胞内羟基自由基（•OH）水平。 除了本红色荧光检测试剂盒外，还可以提供绿色荧光的羟基自由基（•OH）检测试剂。 可以提供各种颜色的总活性氧检测产品，以及不同颜色的各种类型活性氧、活性氮的特异性检测产品。
保存温度
-20℃ 避光
注意事项
1.避免反复冻融。
2.可以根据需要分装后冻存。
3.探针为DMSO溶液，在2-8℃时是固体状态，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
有效期
6个月
检测方法
激光共聚焦显微镜或荧光分光光度计或酶标仪或流式细胞仪
适用样本
1.悬浮细胞
2.贴壁细胞
产品特点
1.使用方便：可用激光共聚焦显微镜直接观察、荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测；
2.背景低，灵敏度高；
3.线性范围宽，使用方便。
仪器准备
1.激光共聚焦显微镜或荧光分光光度计或酶标仪或流式细胞仪，
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
试剂准备
PBS缓冲液或者HBSS
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
4.荧光检测专用黑色96孔板
使用注意事项
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
2.荧光探针标记后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。
3.探针标记完毕并洗净残余探针后，可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描，以确认探针的标记情况是否正常。
4.尽量缩短探针标记后到测定所用的时间，以减少各种可能的误差。
5.O28探针在光照和空气中易被氧化，注意避光密封保存。
6.对不同的细胞，应选择合适的孵育时间，以观察羟自由基的变化。
使用方法
O28探针标记：
1. O28溶液可在新鲜无血清培养基、HBSS缓冲液、PBS缓冲盐溶液稀释到所需浓度，200倍稀释，以此染色工作液更换细胞培养基；也可直接向细胞孵育液体中加入O28探针溶液至所需浓度。
2. 依据细胞羟自由基含量的不同，孵育时间可选择15-90 分钟，在37℃或室温进行避光孵育。
3. 孵育结束后，用新鲜溶液清洗细胞。
4. 用相关仪器进行荧光检测。
荧光显微镜检测：
1. 对贴壁生长细胞或活组织，可直接在荧光显微镜下染色观察；
2. 对悬浮生长细胞，染色后取25-50μl细胞悬液滴到一张显微载玻片上，再盖上一张盖玻片。
3. 荧光显微镜检测。
流式细胞仪分析：
1. 对贴壁生长细胞，用胰酶消化制备成单细胞悬液；对悬浮生长细胞，直接收集细胞。用0.5~1 ml冰冷PBS重悬细胞（5~10万）。
2. 采用560nm波长激发，测定575 nm的发射，羟自由基强度高的细胞有较强的红色荧光。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
