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活性氧(Reactive oxygen species, ROS) 包括过氧化氢（H2O2，Hydrogen peroxide）、羟基自由基（•OH，Hydroxyl radical）、单线态氧（1O2，Singlet oxygen）、一氧化氮（NO，Nitric oxide）、超氧阴离子(•O2-，Superoxide anion)、过氧化自由基(ROO• ，Peroxyl radical)、过氧羟自由基（HOO• ，hydroperoxyl）及其下游产物过氧化物过氧亚硝基阴离子（ONOO-，Peroxynitrite anion）、ClO-和羟化物等，参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。 活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生主要是氧化磷酸化的结果，在呼吸链中，在某些位点会有“泄露”的电子直接和氧气或和其他电子受体反应，在酶或非酶作用下引发一系列反应生成不同种类的活性氧：“泄露”的电子最初和氧气反应生成超氧阴离子自由基(O2•-)(图1A)。超氧阴离子遇水生成H2O2(图1B)，同时过氧化氢也可由氧气在单胺氧化酶(monoamine oxidase,MAO)的作用下生成(图1C)，生成的过氧化氢在髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)的催化下与Cl-反应可生成ClO-(图1D)，在铁或铜离子的催化下发生Fenton反应生成OH•(图1E)，超氧阴离子遇氮氧化物反应生成ONOO-(图1F)。这些生成的高氧化活性的物质统称为活性氧。 活性氧检测试剂盒是一种利用新型荧光探针O12进行细胞活性氧检测的试剂盒。本试剂盒中的O12 ROS探针为绿色荧光的活性氧探针，具有488 / 520nm的最da激发/发射波长。 O12 ROS探针在细胞中活性氧存在的条件下，被氧化生成绿色荧光物质，绿色荧光强度与细胞内活性氧水平成正比，检测O12产物的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平。 O系列活性氧探针具有多种颜色可以选择，可根据情况对样品进行多色标记实验。除了本试剂盒的绿色荧光探针，还可以提供红色荧光的活性氧检测试剂盒。 在激发波长488 nm，发射波长520 nm附近，使用荧光分光光度计、荧光酶标仪、等检测O12产物荧光，从而测定细胞内活性氧水平。 本试剂盒可以用于各种真核培养细胞的检测。本试剂盒提供了活性氧阳性对照试剂，以便于活性氧的检测。 还可以为您提供各种细胞样本、冰冻切片样本的活性氧、活性氮等各种颜色的检测试剂盒产品。
保存温度
-20℃ 避光
注意事项
1.避免反复冻融。
2.可以根据需要分装后冻存。
3.探针为DMSO溶液，在2-8℃时是固体状态，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
有效期
6个月
检测方法
1.流式细胞仪2.荧光显微镜3.激光共聚焦
适用样本
1.悬浮细胞
2.贴壁细胞
产品特点
1.使用方便：可用激光共聚焦显微镜直接观察、荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测；
2.背景低，灵敏度高；
3.线性范围宽，使用方便。
仪器准备
1.激光共聚焦显微镜或荧光分光光度计或酶标仪或流式细胞仪，
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
试剂准备
PBS缓冲液或者HBSS
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
4.荧光检测专用黑色96孔板
使用注意事项
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
2.O12荧光探针在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.荧光探针标记后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。
4.探针标记完毕并洗净残余探针后，可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描，以确认探针的标记情况是否正常。
5.尽量缩短探针标记后到测定所用的时间，以减少各种可能的误差。
6.以下操作步骤仅供参考，请根据实际样本情况调整或参考文献。
使用方法
一、 探针标记
原位标记：仅适用于贴壁培养细胞。
1. 按照1:1000-2000用无血清培养基稀释O12探针。
2. 去除细胞培养基，用PBS洗细胞一次。
3. 加入适当体积稀释好的O12探针。加入的体积以能充分盖住细胞为宜，通常对于六孔板的一个孔加入稀释好的O12探针不少于1毫升。
4. 在37℃细胞培养箱内避光孵育20分钟。
5. 用无血清细胞培养液洗涤细胞三次，以充分去除未进入细胞内的O12探针。
收集后标记：悬浮细胞或贴壁细胞消化处理
1. 按照1:1000用无血清培养基稀释O12探针。
2. 离心移除培养基，用PBS洗细胞一次。
3. 细胞收集后悬浮于稀释好的O12探针中，细胞浓度为1*106-2*107/毫升，37℃细胞培养箱内避光孵育20分钟。每隔3-5分钟颠倒混匀一下，使探针和细胞充分接触。
4. 用无血清细胞培养基洗涤细胞三次，以充分去除未进入细胞内的O12探针。
5. 用无血清细胞培养基重悬细胞。
二、 检测：
对于原位标记探针的样品可以用激光共聚焦显微镜直接观察，或收集细胞后用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测。
荧光强度强，活性氧强度高。
对于收集细胞后标记探针的样品可以用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测，用激光共聚焦显微镜直接观察也可以。
使用488nm激发波长，525nm发射波长，实时或逐时间点检测刺激前后荧光的强弱。O12探针的荧光光谱和FITC非常相似，可以用FITC的参数设置检测。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
