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获取电话H1 人胚胎干细胞 百欧博伟生物 细胞系
细胞简介
平台编号：Bio-117084
规格：1×10?Cells/T25培养瓶
拉丁属名：H1
细胞名称：H1 人胚胎干细胞
细胞描述：人胚胎干细胞，曾用名WA01
形 态：球形克隆，贴壁生长
来源性别：男性
组织：内细胞团
冻存日期/代数：详见 冻存管/培养瓶 标识
建议复苏培养体系：1 个 T25 培养瓶或6cm培养皿
细胞状态：良好
支原体检测结果：阴性
细胞用途：仅供科研使用。
用途：（STR鉴定正确）
注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）
STR鉴定结果：
D5S818 9 11
D13S317 8 11
D7S820 8 12
D16S539 9 13
VWA 15 17
TH01 9.3 13
AMEL X Y
TPOX 8 8
CSF1PO 12 13
H1细胞完全培养基培养人胚胎干细胞
1.培养试剂和材料准备
2.培养流程
2.1.复苏
在开始复苏前，将所有试管、预热后的培养基和培养皿准备好，已确保尽快完成复苏过程。
1. 将冻存管从液氮中取出，快速在37℃水浴槽中解冻，轻柔持续地摇动冻存管，直到只剩下一个小冷冻团。从水浴槽取出冻存管，70%乙醇擦拭进行消毒。
2. 使用移液管将冻存管中含有H9细胞的冻存液轻轻转移至一个含有5-6mL已经预热的完全培养基的15mL离心管中，过程必须轻柔防止吹散细胞团。
3. 室温300g离心5min。
4. 吸出培养基，确保细胞团完整。
5. 然后缓慢加入1mL完全培养基，用手指轻弹离心管底部，使细胞团脱离底部并分散。
6. 轻轻的将此1mL细胞悬液转移至已包被的培养皿/板/瓶，根据最终培养细胞的液体体积，加入ROCK inhibitor Y27632，终浓度为10μM。
7. 将培养皿/板/瓶置于37℃培养箱中，每天更换培养基（换液不需要再添加Y27632，但培养基需提前预热）。
2.2.传代
当集落变得较大、中心变得密集、明亮（对比边缘），相邻的集落开始融合时，此时可进行传代。
1. 传代前， 准备 37 ℃预热好的好无钙镁 PBS 溶液及消化液，完全培养基。
2. 吸走上清，并加入 37℃预热好的 PBS 溶液清洗1次。
3. 加入适量（按 6 孔板每孔加 1ml，6cm 皿加 2ml，10cm 皿加 3ml 的量）的 37℃预热好的消化液。
4. 37℃放置1-2min，用手指轻弹皿/板/瓶身，显微镜下观察到大部分克隆边缘开始脱离培养皿/板底，克隆内部大部分细胞成团脱落。
5. 加入适量的完全培养基终止消化。
6. 移入离心管，300g离心5min，
7. 离心后重悬（重悬步骤参照复苏4-5步）。
8. 传代比例为 1：6—1：8，根据最终培养细胞的液体体积，加入ROCK inhibitor Y27632，终浓度为10μM。
9. 将培养皿/板/瓶置于37℃培养箱中，每天更换培养基（换液不需要再添加Y27632，但培养基需提前预热）。
2.3.冻存
当集落变得较大、中心变得密集、明亮（对比边缘），相邻的集落开始融合时，此时可进行传代。
1. 传代前， 准备 37 ℃预热好的好无钙镁 PBS 溶液及消化液，完全培养基。
2. 吸走上清，并加入 37℃预热好的 PBS 溶液清洗1次。
3. 加入适量（按 6 孔板每孔加 1ml，6cm 皿加 2ml，10cm 皿加 3ml 的量）的 37℃预热好的消化液。
4. 37℃放置1-2min，用手指轻弹皿/板/瓶身，显微镜下观察到大部分克隆边缘开始脱离培养皿/板底，克隆内部大部分细胞成团脱落。
5. 加入适量的完全培养基终止消化。
6. 移入离心管，300g离心5min。
7. 离心后重悬（重悬步骤参照复苏4-5步）。
8. 使用预冷的冻存液轻轻的重悬细胞团，然后将细胞悬液转移至冻存管，冻存按 6 孔板每孔冻 1 支，6cm 皿冻 2-4 支，10cm 皿冻 6-12 支（冻存液为：90%H9细胞完全培养基与 10%的DMSO。
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