产品概述
单线态氧(1O2)检测试剂盒是一种利用荧光探针O66进行单线态氧检测的试剂盒。O66可以自由穿过细胞膜,进入细胞内后,在单线态氧存在的条件下,O66探针被氧化生成荧光物质O66F,O66F的绿色荧光强度与细胞内单线态氧水平成正比,检测O66F绿色荧光强度就可以知道细胞内单线态氧的水平。 在激发波长516 nm,发射波长606 nm附近,使用荧光酶标仪、荧光分光光度计、流式细胞仪、荧光显微镜、激光共聚焦显微镜等检测O66F 荧光强度,从而测定细胞内单线态氧水平。 O66荧光探针对单线态氧(1O2)有较高的选择性,但是也会与活性羟基有反应。 单线态氧(1O2,Singlet oxygen)是活性氧家族的一员,活性氧(Reactive oxygen species, ROS) 包括过氧化氢(H2O2,Hydrogen peroxide)、羟基自由基(•OH,Hydroxyl radical)、单线态氧(1O2,Singlet oxygen)、一氧化氮(NO,Nitric oxide)、超氧阴离子(•O2-,Superoxide anion)、过氧化自由基(ROO• ,Peroxyl radical)、过氧羟自由基(HOO• ,hydroperoxyl)及其下游产物过氧化物单线态氧(1O2,Peroxynitrite anion)、ClO-和羟化物等,参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。 活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生主要是氧化磷酸化的结果,在呼吸链中,在某些位点会有“泄露”的电子直接和氧气或和其他电子受体反应,在酶或非酶作用下引发一系列反应生成不同种类的活性氧:“泄露”的电子最初和氧气反应生成超氧阴离子自由基(O2•-)(图1A)。超氧阴离子遇水生成H2O2(图1B),同时过氧化氢也可由氧气在单胺氧化酶(monoamine oxidase,MAO)的作用下生成(图1C),生成的过氧化氢在髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)的催化下与Cl-反应可生成ClO-(图1D),在铁或铜离子的催化下发生Fenton反应生成OH•(图1E),超氧阴离子遇氮氧化物反应生成ONOO-(图1F)。这些生成的高氧化活性的物质统称为活性氧。 本试剂盒可以用于各种真核培养细胞的检测。 O系列活性氧探针具有多种颜色可以选择,可根据情况对样品进行多色标记实验。除了本试剂盒的绿色荧光探针,还可以提供红色、蓝色、深红色荧光的活性氧检测试剂盒。 可以为您提供各种细胞样本、切片样本、组织样本的活性氧、活性氮检测试剂盒产品。
保存温度
-20℃ 避光
注意事项
1.避免反复冻融。
2.可以根据需要分装后冻存。
3.探针为DMSO溶液,在2-8℃时是固体状态,冬季气温较低时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解,从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
有效期
6个月
检测方法
1.流式细胞仪2.荧光显微镜3.激光共聚焦
适用样本
1.悬浮细胞
2.贴壁细胞
产品特点
1.使用方便:可用激光共聚焦显微镜直接观察、荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测;
2.背景低,灵敏度高;
3.线性范围宽,使用方便。
仪器准备
1.激光共聚焦显微镜或荧光分光光度计或酶标仪或流式细胞仪,
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
试剂准备
PBS缓冲液或者HBSS
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
4.黑色96孔板
使用注意事项
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体收集至管底,避免开盖时液体洒落。2.荧光探针标记后,一定要洗净残余的未进入细胞内的探针,否则会导致背景较高。
3.探针标记完毕并洗净残余探针后,可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描,以确认探针的标记情况是否正常。
4.尽量缩短探针标记后到测定所用的时间,以减少各种可能的误差。
5.原位检测必须使用荧光检测专用的黑色透明底96孔细胞培养板。
6.以下操作步骤仅供参考,请根据实际样本情况调整或参考文献。
使用方法
探针染色工作液配制:
1. 根据样本数量,用HBSS将O66荧光染料500-1000倍稀释,配制成染色工作液。
细胞探针标记
对于贴壁细胞,可以进行原位标记
1. 培养皿/培养板准备细胞样本。
2. 待细胞生长到合适丰度,吸除培养液,用PBS洗涤细胞。
3. 加入适量37℃预热的含探针工作液。于生长状态下孵育10分钟~90分钟(具体孵育时间需根据细胞类型而定,需预实验优化)。
4. 移除染色液,用PBS(pH7.4)洗涤细胞3次。
5. 荧光显微镜(含合适滤片)或流式细胞仪、荧光酶标仪下观察。
最da激发/发射波长为506 / 526 nm。
对于悬浮细胞
1. 离心,吸除上清。
2. 用PBS洗涤细胞。
3. 利用37℃预热的探针工作液100-200 μl重悬细胞,于生长状态下孵育20分钟~60分钟(具体时间需根据细胞类型而定,需预实验优化)。
4. 离心,吸除染色液,加入PBS(pH7.4)重悬细胞,洗涤3次。
5. 流式细胞仪、荧光酶标仪检测。
6. 最da激发/发射波长为506 / 526 nm。
荧光检测:
1. 对于原位标记探针的样品可以用荧光酶标仪检测,荧光显微镜,激光共聚焦显微镜直接拍照分析(需要有相关的荧光强度分析软件),或收集细胞后用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测。
2. 对于收集细胞后标记探针的样品可以用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测,或者用激光共聚焦显微镜直接拍照分析亦可。
3. 使用506 nm激发波长,526 nm发射波长,实时或逐时间点检测刺激前后荧光的强弱。单线态氧浓度高则荧光强度强。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!