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活性氮检测试剂盒是一种利用荧光探针O53进行活性氮检测的试剂盒。O53探针本身荧光很弱，可以自由穿过细胞膜，进入细胞内后，在活性氮存在的条件下，O53与活性氮反应生成强荧光物质，发出的红色荧光强度与细胞内活性氮水平成正比，检测O53的荧光强度就可以知道细胞内活性氮的水平。 O53的荧光zui大激发波长是518 nm，zui大发射波长是606 nm。 在激发波长518 nm，发射波长606 nm附近，使用激光共聚焦显微镜、荧光显微镜、荧光分光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪等检测O53荧光强度，从而测定细胞内活性氮水平。 本试剂盒可以用于各种真核培养细胞的检测。 活性氮检测试剂具有高的灵敏度，良好的选择性，短的响应时间，以及可对检测对象在原位进行实时监控和观察等。更重要的是，这种检测技术对细胞内活性氮的内源性分布不产生巨大的外加干扰，从而能zui大程度地得到内源性活性氮变化的真实信息。 活性氮（reactive nitrogen species，RNS）是指NO与包括活性氧在内的化合物相互作用,生成一系列包括ONOO•及其质子形式过氧亚硝酸（HOONO）等具有高度氧化活性的自由基和硝基类化合物,这些与活性氧相对应的以NO为中心的衍生物称为活性氮。活性氮主要包括氮氧化物一氧化氮（NO）和二氧化氮（NO2）、过氧化亚硝酰阴离子（ONOO•）、亚硝酰氢（HNO）、亚硝酸根离子（NO2-）和氨等。 BBoxiProbe® O系列活性氮探针具有多种颜色可以选择，可根据情况对样品进行多色标记实验。除了本试剂盒的红色荧光探针，还可以提供蓝色、红色、深红色荧光的活性氮检测试剂盒。 可以为您提供各种细胞样本、切片样本、组织样本的活性氧、活性氮检测试剂盒产品。 可以为您提供总活性氧、总活性氮和各种亚型的活性氧/活性氮的检测试剂盒产品。 可以为您提供各种红色、红色、蓝色、深红色的活性氧/活性氮检测试剂盒产品。 可以提供各种细胞分析试剂盒。包括细胞凋亡、活性、增殖、毒性、活性氧、周期、细胞代谢、氧化应激、膜流动性、膜电位、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、胞外酸化、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种细胞检测试剂盒产品。
保存温度
-20℃ 避光
注意事项
1.探针长期不用可以-20℃保存。
2.避免反复冻融。可以根据需要分装后冻存。
3.染色液A为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
4.可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
5.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
6个月
检测方法
1.荧光分光光度计2.荧光酶标仪
适用样本
细胞
产品特点
1.使用方便：可用激光共聚焦显微镜直接拍照分析、荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测；
2.背景低，灵敏度高；
3.线性范围宽，使用方便。
仪器准备
1.荧光分光光度计/荧光酶标仪等
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
试剂准备
PBS缓冲液或者HBSS
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
4.黑色96孔板
使用注意事项
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
2.染色液为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
3.使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。
4.尽量缩短探针标记后到测定所用的时间，以减少各种可能的误差。
5.必须使用荧光检测专用的黑色96孔板。
使用方法
探针染色工作液配制：
根据样本数量，用HBSS将O53荧光染料100倍稀释，配制成染色工作液。
细胞探针标记
原位标记：仅适用于贴壁培养细胞。
1. 培养板/培养皿准备细胞样本。
2. 待细胞生长到合适丰度，去除细胞培养基，用PBS洗细胞一次。
3. 加入适量体积37℃预热的含O53探针工作液。
4. 在37℃细胞培养箱内于生长状态下避光孵育20分钟～40分钟（具体孵育时间需根据细胞类型而定，需预实验优化）。
5. 移除染色液，用PBS（pH7.4）洗涤细胞3次。以充分去除未进入细胞内的O53探针。
6. 加入200 μl HBSS缓冲液。
7. 荧光酶标仪、荧光显微镜（含合适滤片）检测。zui大激发/发射波长为518 nm / 606 nm。
收集后标记：悬浮细胞或贴壁细胞消化处理
1. 离心，吸除上清培养基。
2. 用PBS洗细胞一次。
3. 细胞收集后重悬浮于稀释好的37℃预热的O53探针工作液中，细胞浓度为1*106-2*107/毫升。
4. 于生长状态下37℃细胞培养箱内避光孵育20-40分钟（具体时间需根据细胞类型而定，需预实验优化）。每隔3-5分钟颠倒混匀一下，使探针和细胞充分接触。
5. 离心，吸除染色液，加入PBS（pH7.4）重悬细胞，洗涤3次。以充分去除未进入细胞内的O53探针。
6. 用HBSS/PBS/无血清细胞培养基重悬细胞。
7. 用荧光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪检测。
zui大激发/发射波长为518 nm / 606 nm。
活性氮检测：
1. 对于原位标记探针的样品可以用荧光酶标仪检测，或者用激光共聚焦显微镜、荧光显微镜，直接拍照分析（需要有相关的荧光强度分析软件）。
2. 或收集细胞后标记探针然后用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测。
3. 对于收集细胞后标记探针的样品可以用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测，用激光共聚焦显微镜直接拍照分析也可以（需要有相关的荧光强度分析软件）。
4. 使用518 nm激发波长，606 nm发射波长，实时或逐时间点检测刺激前后荧光的强弱。
5. 荧光强度强，活性氮含量高。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
