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一键询价产品概述
细胞周期检测试剂盒是利用细胞内DNA能够和荧光染料结合的特性,细胞各个时期其DNA含量不同从而结合的荧光染料不同,流式细胞仪检测的荧光强度也不一样来检测细胞周期。 细胞周期(cell cycle)是指细胞从前一次分裂结束起到下一次分裂结束为止的活动过程,通常由G0/G1期、S期、G2期和M期组成。G1期:细胞开始RNA和蛋白质的合成,但DNA含量仍保持二倍体。S期:DNA开始合成,这时细胞核内DNA的含量介于G1期和G2期之间。当DNA复制结束成为4倍体时,细胞进入G2期。G2期的细胞继续合成RNA及蛋白质,直到进入M期。因此,单纯从DNA含量无法区分G2期和M期。一旦有丝分裂发生,细胞分裂成两个细胞,这两个细胞或者进入下一个细胞周期,或者进入静止期(G0期),而G0期从DNA含量上同样无法与G1期区分。因此,整个复制周期可以描述为G0/G1、S、G2/M期。通过核酸染料PI标记DNA,并由流式细胞仪进行分析,可以得到细胞各个时期的分布状态,计算出G0/G1%、S%、G2/M%,了解增殖能力,在肿瘤病理学研究中,通常以S期细胞比率作为判断肿瘤增殖状态的指标。 本试剂盒中的NucGreen L1核酸荧光染料为绿色荧光的核酸染料,能选择性的嵌入核酸DNA双链螺旋的碱基之间与之结合,其结合的量与DNA的含量成正比例关系,用流式细胞仪进行分析,就可以得到细胞周期各个阶段的DNA分布状态,从而计算出各个期的百分含量。NucGreen L1染色后,假设G0/G1期细胞的荧光强度为1,那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧 光强度的理论值为2,正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1-2之间。 常规细胞周期检测试剂盒采用PI染料,当细胞自身有红色荧光时,不能用PI进行细胞周期检测,NucGreen L1适合用于细胞自带红色的细胞样本的周期检测。 除了本试剂盒提供的绿色荧光细胞周期检测产品,还能提供红色、蓝色、橙色、深红色等荧光颜色的细胞周期检测试剂盒产品。
保存温度
-20℃避光
注意事项
1.染液短期2周内可以2-8℃保存。染料长期不用可以-20℃保存。避免反复冻融。
2.试剂拆封后请尽快使用完!
有效期
1年
检测方法
流式细胞仪
适用样本
1.悬浮细胞 2.贴壁细胞
产品应用
流式细胞仪
仪器准备
1.流式细胞仪
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
试剂准备
1.PBS 缓冲液(pH7.4,实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液(1X))
2.或者HBSS(Hank's Balanced Salt Solution)
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
1.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
2.最hao使用含EDTA的细胞消化液。
3.洗涤细胞离心转速不可超过800×g。
4.乙醇固定时离心大概采用2000×g力5分钟,离心力太小可能部分细胞难以沉淀。
5.固定时在振荡器上轻轻振荡细胞,并缓慢滴加75%乙醇,直接加入会导致细胞团聚的现象,很难重悬成单细胞。或者先用冷PBS悬浮细胞,充分悬浮,使细胞充分分散成单细胞。之后缓慢加入无水乙醇,终浓度为70-90%乙醇。乙醇固定之后须无细胞沉淀。
6.为防止不同批次细胞在实验时本身所出周期不同导致重复性差,可以在实验前进行细胞的同步化处理,减少批间差异。实验细胞应处于对数生长期,不能是完全长满,一般在50~80%比较好。
7.分析的时候需要的是单个的细胞,400目筛网过滤是用来将粘在一起的细胞团滤掉,否则会出现人为的多倍体干扰,不过如果经验丰富的操作人员也可以gate掉。如果没有条件过滤,请在染色之前将细胞弹的很散,再进行染色。
8.本试剂盒也可用于非固定细胞周期检测。
9.组织处理方法:用剪刀将组织剪成小块,用0.25%胰酶消化30min-1h,200-400目筛网过滤细胞,获得单细胞悬液。如组织难以消化,可加入适量胶原酶。
使用方法
1. 染色工作液的配制:
根据样本数量,用37℃培养箱预热的PBS将BBcellProbe® NucGreen L1荧光染料500倍稀释,配制成染色工作液。
2. 收集样本细胞,细胞数量在5-10X106个。
3. 用冷PBS洗涤细胞两次。
4. 在15ml离心管中,用500 μl PBS重悬细胞。
5. 滴加2-5ml冷乙醇4℃固定过夜或-20℃固定1小时。
6. 取5X106细胞,在15ml锥形离心管中1000×g离心10分钟,弃上清,收集细胞。
7. 用冷PBS洗涤细胞两次。
8. 用500 μl冷PBS重悬细胞。
9. 加入Rnase A溶液20 μl, 37℃水浴30分钟。
10. 用400目细胞筛网过滤。
11. 在1000×g离心10分钟,弃上清,收集细胞。
12. 加入500 μl NucGreen染液重悬细胞,轻轻混匀后4℃避光孵育30分钟-2小时。
13. 流式检测结果。激发波长为488nm。发射波长526nm。
采用适当分析软件进行细胞DNA含量分析和光散射分析。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!