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AO/EB双染细胞凋亡检测试剂盒是采用DNA探针双染细胞核的方法检测细胞的状态，是细胞凋亡形态学研究常用的染色方法。 吖啶橙（Acridine Orange，AO）为一种具有细胞膜通透性的荧光染料，该染料能透过活细胞膜，使核DNA和RNA染色。它与细胞中DNA和RNA结合量存在差别，复合物可发出不同颜色的荧光，AO与dsDNA结合时发出绿色荧光，而与ssDNA和RNA结合时发出红色荧光。当与DNA结合时，它与荧光素在光谱上非常相似，激发最大值为502nm，发射最大值为525nm（绿色）。当它与RNA结合时，激发最大值移至460nm（蓝色），发射最大值移至650nm（红色）。 在荧光显微镜下观察，吖啶橙可透过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光；而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体。吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光，或黄绿色碎片颗粒；而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。吖啶橙AO常与溴化乙啶EB合用双染，因EB只染死细胞使之产生桔黄色荧光，由此可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。可以提供各种细胞检测试剂盒。包括细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。
保存温度
2-8℃避光
注意事项
1.长期不用可以-20℃保存。
2.染色液避免反复冻融。多次冻融会导致失效。
3.染色液需要长期保存时可以根据使用情况进行小量分装后-20℃保存。
4.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
6个月
检测方法
1.流式细胞仪
2.激光共聚焦
3.荧光显微镜
适用样本
1.悬浮细胞
2.贴壁细胞
产品应用
1.流式细胞仪
2.激光共聚焦
3.荧光显微镜
试剂准备
1.PBS 缓冲液（pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液（1X））
2.或者HBSS（Hank's Balanced Salt Solution）
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
2.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
3.本染色试剂盒可用于细胞、细胞涂片等。以下以培养细胞的荧光显微镜检测为例，其他方法请参阅相关资料。
4.AO将DNA染成绿色，RNA染成红色，红色荧光在激发光下不久就会消失，等AO的红色荧光消失之后再拍照，否则会干扰EB的红色坏死细胞。
使用方法
1. 染色缓冲液的配制：根据样品数按下列比例配制染色缓冲液。 取100 μL试剂C加900 μl无菌去离子水稀释，混匀即成染色缓冲液。
2. 收集样本细胞，细胞数量在10X105个以内。
3. 用PBS洗涤细胞两次。
4. 用500 μl染色缓冲液将细胞重悬。
5. 加入5μl AO染色液A。
6. 加入5 μl EB染色液B。
7. 轻轻混匀后4℃避光孵育10-20分钟。
8. 用PBS洗涤细胞。
9. 用荧光显微镜或流式细胞仪检测结果。AO-DNA复合物的最da激发波长为488nm，最da发射波长为515nm，EB-DNA复合物的最da激发和最da发射波长分别为518nm和605nm。
结果分析 ：
正常活细胞的核染色质着绿色，形态结构正常；早期凋亡细胞的膜结构完整，核染色质着绿色，但核已开始固缩或呈串珠状；晚期凋亡细胞，核染色质发橙红色荧光，呈固缩状或串珠状，有时核碎裂散布于胞浆中；有时还可见到细胞核结构正常，但细胞着红色，为非凋亡的死亡细胞。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
