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细胞膜电位检测试剂盒采用细胞荧光探针M09检测细胞膜电位的变化。 M09是一种检测细胞膜电位的亲脂性阴离子荧光染料，它本身无荧光，当进人细胞与胞浆内的蛋白质结合后才发出荧光。M09最da吸收波长490nm，最da发射波长516nm。 M09荧光探针容易进入去极化的细胞。细胞内荧光强度增加，更多探针流入细胞，表明细胞的去极化增加，细胞膜的内部向正方向极化，外部向负方向极化，膜两侧的电位差降低；反之，细胞内荧光强度降低，表示细胞超极化，细胞膜的内部向负方向极化，外部向正方向极化，细胞膜两侧的电位差增加。 M09不受线粒体膜电位影响，使其能特异性的用于测量细胞膜电位变化。 可以提供各种细胞检测试剂盒。包括细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。
保存温度
2-8℃避光
注意事项
1.染料短期2周内可以2-8℃保存。染料长期不用可以-20℃保存。避免反复冻融。
2.探针液A为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
4.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
六个月
检测方法
1.流式细胞仪
2.激光共聚焦
3.荧光显微镜
适用样本
1.悬浮细胞
2.贴壁细胞
产品应用
1.流式细胞仪
2.激光共聚焦
3.荧光显微镜
试剂准备
1.PBS 缓冲液（pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液（1X））
2.或者HBSS（Hank's Balanced Salt Solution）
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
2.M09探针在冬天温度较低时会凝固，可以20～25℃水浴温育片刻全部融解后离心使用。
3.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
4.始终保持平衡染液中pH值的一致性，因为pH值的变化将影响膜电位。
5.与染料达到平衡的细胞悬液中如果含有蛋白，他们将与部分染料结合，降低染料的浓度，引起假去极化。
6.根椐细胞种类、实验条件不同流式细胞仪设置不同。
7.M09染色并洗涤后尽量在30分钟内完成后续检测。
8.M09染色探针不可以一次性全部配好，应根据每次细胞数量现配现用，长期不用的可以分装后用铝箔纸包好-20℃冻存。避免反复冻融。
使用方法
以下以细胞为例，实验步骤仅做参考，具体最jia细胞数量，最jia染色时间，因细胞不同而不同，根据实际情况调整。
细胞准备：
贴壁细胞：96孔板，细胞数量约40000-80000/孔，100 μl培养基。
悬浮细胞：96孔板，细胞数量约125000-250000/孔，100 μl培养基。
组织样本：组织样本可以用玻璃匀浆器匀浆成单细胞悬液后按照细胞样本的方法检测。也可以用其他细胞悬液制备的试剂盒处理组织后检测。
染色工作液准备：
1. 在HBSS缓冲液中加入终浓度为20mM的Hepes缓冲液。置37℃培养箱预热。
2. 根据样本数量，用37℃培养箱预热的染料稀释液试剂B将M09荧光染料10倍稀释。再用以上HBSS或相应的无血清培养基或其他缓冲液将探针M09进行100-500倍稀释，配制成1X染色工作液。
染色：
1. 如果是在培养板原位检测，移除培养基，用PBS洗细胞一次，加入100 μl染色工作液。
2. 如果流式检测，收集样本细胞，细胞数量在2-5X105个。用PBS洗涤细胞两次。离心收集细胞。然后用500 μl-1000 μl M09染色工作液将细胞重悬。
3. 加入染色工作液的细胞在培养箱中或者室温避光孵育30分钟-1小时。
4. 用荧光酶标仪/激光共聚焦显微镜或流式细胞仪/荧光分光光度计检测分析结果。
用荧光酶标仪或激光共聚焦显微镜检测。检测相关刺激后荧光强度的变化。
或者用流式细胞仪、荧光分光光度计检测：激发波长为488nm，发射波长为515nm左右。如果激发波长不能设置为488nm 时，可以在488-493nm 范围内设置激发波长。
结果分析 ：
检测时可以把激发光设置为488nm，发射光设置为515-520nm；
荧光强度增加，表示细胞去极化，探针流入细胞。显示细胞跨膜电位较原来的参照状态或参照细胞更正，膜电位的绝dui值变低。
荧光强度降低，表示细胞超极化，探针流出细胞。显示细胞跨膜电位较原来的参照状态或参照细胞更负，膜电位的绝dui值变高。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
