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产品说明
大肠杆菌DH5α是一种常用于质粒克隆的菌株,在使用pUC系列的质粒进行转化时,可与载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补,可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。基因型:F-,φ80dlacZ△M15,△(lacZYA-argF)U169,deoR,recA1,endA1,hsdR17(rk-,mk+),phoA,supE44,λ-,thi-1,gyrA96,relA1。
产品特点
1.DNA稳定性高。
2.有利于高纯度DNA提取。
3.可用于蓝白斑实验
4.转化效率高达1-3×109cfu/μg
操作步骤
1.取感受态细胞置于冰浴中,放置10分钟。
2.向感受态细胞中加入1-5μl含有1pg-100ng的质粒DNA,轻轻地敲打4-5下。
3.冰浴30分钟,不要震荡。
4.42℃热击45-60秒,不要震荡,迅速转移到冰浴中,放置2分钟。
5.加入950μl室温的SOC培养基。
6.混匀后,置于37℃的摇床上,250rpm震荡培养60min。
7.将含有抗生素的平板加热到37℃,放置半个小时,使其表面干燥,易于均匀涂布。
8.根据实验要求,取适量转化的感受态的细胞,加到含有抗生素的固体琼脂糖培养基上(LB或SOC),用无菌棒将细胞均匀涂开,将平板置于37℃培养箱,倒置过夜培养(8-12h)。
运输和储藏
干冰运输,收到后请置于-80℃。
注意事项
1.刚刚融化的细胞,转化效率最高
2.避免反复冻融
3.避免用移液枪吸吹
4.整个操作过程要轻柔