获取电话H9 胚胎干细胞（有滋养层）培养步骤与方法！
H9人胚胎干细胞系是国际上最通用胚胎干细胞系之一，该细胞是从人类早期胚胎内细胞团分离出来，具有体外培养无限增殖、自我更新和多向分化的特性。可为细胞遗传发育以及疾病模型研究提供丰富的实验材料。
一、细胞简介
平台编号：bio-114998
规格：1*10E6
细胞名称：H9 胚胎干细胞（有滋养层）
中文名称：胚胎干细胞
细胞描述：人类胚胎干细胞，曾用名 WA09
物种：人，女性组织：内细胞团
细胞来源：2006 年引进
完全培养液：hES 完全培养液（目录号：SCSP-613）。配方见备注批次/冻存日期：详见 冻存管/培养瓶 标识
参考传代周期：7 天参考传代比例：1:2-1:4
参考换液频率：每天
2×冻存液：hES 完全培养基 20%，FBS 60%，DMSO 20%。或使用 hES 专用冻存液（目录号：SCSP-668） 进行冻存
培养基和添加剂：D-MEM/F-12培养基(GIBCO,货号12400024，添加L-glutamine 150mg/L, NaHCO3 1.5g/L)及0.005 mg/ml 胰岛素，90%；优质胎牛血清，10%。 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度。
细胞形态：克隆状生长，需使用 CF-1 MEF（SCSP-105R）作为饲养层细胞支原体检测结果：阴性
运输和保存：干冰运输，1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。
STR 鉴定结果：
Amelogenin: X D5S818: 11,12
D13S317: 9
D7S820: 9,11
D16S539: 12,13
vWA: 17
THO1: 9
TPOX: 10,11
CSF1PO: 11
注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用。
二、H9人胚胎干细胞一般培养方法
1、组织块培养法
A）按照前述方法取材，将组织剪成或切成1mm3大小的小块，并加入少许培养基使组织湿润。
B）将小块均匀涂布于瓶壁，每小块间距0.2 cm～12.5px，一般在25mL培养瓶（底面积为437.5px2）可接种20～30小块为宜，小块放置后，轻轻翻转培养瓶，使瓶底朝上，然后于瓶内加入适量培养基盖好瓶塞，将瓶倾斜放置在37℃温箱内。
C）培养2～4小时，待小块贴附后，将培养瓶缓慢翻转平放，静置培养，动作要轻，严禁摇动和来回振荡，以防H9人胚胎干细胞由于冲动而使小块漂起而造成培养失败，若组织块 不易贴壁可预先在瓶壁涂一薄层血清、胎汁或鼠尾胶原等。开始培养时培养基不宜多，以保持组织块湿润即可，培养24小时后再补液，培养初期移动和观察时要轻 拿轻放，开始几天尽量不去搬动，以利贴壁和生长，培养3～5天时可换液，一方面补充营养，一方面去除代谢产物和漂浮小块所产生的毒性作用。
2、消化培养法
该方法是采用前述的消化分散法，将妨碍细胞生长的细胞间质（包括基质、纤维等）去除，使细胞分散形成细胞悬液，然后分瓶培养。
3、悬浮细胞培养法
对于悬浮生长的细胞，如白血病细胞、淋巴细胞、骨髓细胞、胸水和腹水中的癌细胞和免疫细胞无需消化，可采用低速离心分离，直接培养，或经淋巴细胞分层液分离后接种培养。
三、H9人胚胎干细胞培养步骤
1、培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基；优质胎牛血清，10%；添加0.01mg/ml胰岛素；双抗，1%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。
2、细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
四、注意事项
1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。
2、收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。
3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。
4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
