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产碱普罗威登斯菌的活化步骤与培养方法!
一、菌种简介
平台编号:bio-67866
规格:冻干物
拉丁属名:Providencia alcalifaciens
菌株名称:产碱普罗威登斯菌
其它编号:ATCC 51902
培养基编号:121
培养温度:37℃
用途:质量控制菌株
培养基信息
培养基编号:121
名称:Tryptic Soy Agar
备注:胰蛋白栋 17 g 大豆蛋白栋 3 g 葡萄糖 2.5 g NaCl 5.0 g K2HPO4 2.5 g 琼脂 15 g pH 7.3 +/- 0.2.
用途:质量控制菌株
注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用。
二、产碱普罗威登斯菌 收货须知:收货当天发现异常,请在 24 小时内及时联系客服,逾期视为收货良好;干粉一次用完不得留存,活化 1~2 代后恢复活力即可使用,斜面、菌液使用详见附页。请严格按照本说明进行活化,否则造成菌种异常、失活等情形,不予提供补发服务。
三、产碱普罗威登斯菌 培养条件:30℃,好氧,营养琼脂培养基,24-48h。营养琼脂培养基:牛肉膏 3.0g,蛋白胨 10.0g,NaCl 5.0g,琼脂 20.0g(液体培养基不含),蒸馏水 1.0L,pH 7.0。121℃,15min 灭菌。[注] 培养芽孢杆菌时加入 5mgMnSO4·H2O,则有利于产生芽孢。
四、产碱普罗威登斯菌 活化步骤
①准备 1 支含有 5~10mL 液体培养基的试管和 2 个平板;
②安全柜中打开,用酒精灯灼烧顶部,后迅速滴上无菌水使之破裂, 随后用镊子将其敲碎;
③吸取 0.5mL 液体培养基打入冻干管, 充分溶解后重新打回液体试管中,混匀;
④吸取 0.2mL 菌悬液打入平板中,涂布均匀,重复两次获得两个平板;
⑤将液体试管和平板全部置于上述培养条件下培养,菌种长出即可使用。
五、产碱普罗威登斯菌 培养方法
1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。
2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。
3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备 菌种制备。
4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。
5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。
6、如果有些生产菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。