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1.简介
谷物和豆类是人类和动物饮食的主要组成部分。半乳糖基蔗糖(棉籽糖、水苏糖和毛蕊草糖)是许多谷物和豆类的主要成分,谷物豆类的抗营养性通常与这类低聚糖的存在有关。半乳糖基蔗糖在上上部消化道不被水解,而在小肠下端,在细菌作用下被代谢,产生甲烷、氢和二氧化碳,易导致肠胃胀气和腹泻。因此,半乳糖基蔗糖是单胃动物饮食的抑制因子。
从豆类粉中提取半乳糖基蔗糖可以使用集中溶剂,通常为水和酒精的混合物。在提取前将内源性α-半乳糖苷酶和转化酶灭活非常重要。
使用色谱法可以分离并定量检测提取的半乳糖基蔗糖,但是这些方法通常为半定量方法。高效液相色谱法和低压液相色谱法可以定量,但是消耗时间长,尤其是样品提取方面。
众所周知,棉籽糖、水苏糖和毛蕊草糖可以被α-半乳糖苷酶水解为D-半乳糖和果糖。目前,市场上已经有检测棉籽糖的生化试剂盒。这些试剂盒中采用了从绿咖啡豆中提取的α-半乳糖苷酶,能够快速水解棉籽糖,但是对水苏糖和毛蕊草糖的作用非常缓慢,而且在指定的孵育条件下不能完全水解低聚糖。而Megazyme试剂盒采用来自黑曲霉的酶,能够完全并快速的催化棉籽糖、水苏糖和毛蕊草糖水解为D-葡萄糖和蔗糖。
2.检测原理
在α-半乳糖苷酶和转化酶的作用下,半乳糖基蔗糖水解为D-葡萄糖、D-半乳糖和D-果糖。然后使用葡萄糖氧化酶/过氧化物酶试剂测定D-葡萄糖。该方法无法区分棉籽糖、水苏糖和毛蕊草糖,但是可以作为一个整体检测。1摩尔棉籽糖含有1摩尔D-葡萄糖,浓度以摩尔表示。同时测定样品提取物中的游离蔗糖和D-葡萄糖。