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获取电话9号培养基 百欧博伟生物 微生物菌种
一、背景
9号培养基用于多粘菌素B等抗生素效价测定的底层培养基，成分(g/L)：胰酶消化酪蛋白胨17.0；大豆粉木瓜酶消化物3.0；氯化钠5.0；磷酸氢二钾2.5；葡萄糖2.5；Agar/琼脂20.0；pH值7.2±0.1 25℃。
用法：称取本品50.0g，加热溶解于1000ml蒸馏水中，分装，121℃高压灭菌15分钟，备用。
硫酸多粘菌素B(多粘菌素B)多粘菌素系由多粘芽胞杆菌（bacilluspolymyxa）产生的一组多肽类抗生素。多粘菌素b和e供药用。常用其硫酸盐，为白色结晶性粉末，易溶于水，有引湿性。在酸性溶液中稳定，其中性溶液在室温放置一周不影响效价，碱性溶液不稳定。
多粘菌素B抗菌谱及临床应用与多粘菌素E相似，对革兰阴性杆菌，如大肠杆菌、绿脓杆菌、副大肠杆菌、肺炎克雷白杆菌、嗜酸杆菌、百日咳杆菌及痢疾杆菌等有抑制或杀菌作用。临床上主要用于敏感菌引起的感染及绿脓杆菌引起的泌尿系统感染、以及眼、气管、脑膜炎、败血症、烧伤感染以及皮肤粘膜感染等。
多粘菌素B对绿脓杆菌、大肠杆菌、肺炎克雷白杆菌，以及嗜血杆菌、肠杆菌属、沙门菌、志贺菌、百日咳杆菌、巴斯德菌和弧菌等革兰阴性菌有抗菌作用。变形杆菌、奈瑟菌、沙雷菌、普鲁威登菌、革兰阳性菌和专性厌氧菌均对本类药物不敏感。细菌对本品与多粘菌素E之间有交叉耐药性，但对本类药物与他类抗菌药物间则没有交叉耐药性发现。
二、应用
用于多重耐药鲍曼不动杆菌对多粘菌素B的耐药机制研究：
测临床分离鲍曼不动杆菌中携带的β-内酰胺酶基因及外排泵基因,体外诱导鲍曼不动杆菌对多粘菌素B产生耐药,以探讨其对多粘菌素B的耐药机制。
三、方法
1、连续收集临床分离的63株非重复多重耐药鲍曼不动杆菌,采用微量肉汤稀释法测定亚胺培南、美罗培南、头孢他啶、头孢吡肟、左氧氟沙星、环丙沙星、阿米卡星、多粘菌素B及头孢哌酮舒巴坦的最低抑菌浓度（MICs）。
2、采用肠杆菌科基因间重复序列-聚合酶链反应（ERIC-PCR）获得63株鲍曼不动杆菌的指纹图谱并进行同源性分析。
3、采用聚合酶链反应（PCR）检测β-内酰胺酶基因TEM、AmpC、OXA-23、KPC、IMP、VIM,外排泵基因adeB、adeG、adeJ、adeR、adeS,两组份调节系统基因pmrA、pmr B。
4、采用体外实验对收集的菌株进行诱导耐药,以获得多粘菌素B耐药的鲍曼不动杆菌。
5、采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应（RT-qPCR）检测诱导耐药菌株及原始敏感菌株的外排泵基因adeB、adeJ、adeG及两组份调节系统基因pmrA、pmr B的m RNA表达情况,分析其表达差异。
6、对负责脂质A生物合成的基因lpxA/lpxC/lpxD及两组份调节系统基因pmr A、pmrB进行PCR扩增并将扩增产物测序,探讨耐药菌株是否发生特异性突变。
7、采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）对诱导耐药的菌株及原始敏感菌株进行检测,分析其蛋白质差异。
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