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产品名称 | 货号 | 规格 | 价格 |
Recombinant Enterokinase重组肠激酶 | ZY-63L017 | 10 x 5000 U | 45000 |
产品描述
肠激酶（Enterokinase）是一种蛋白酶，高度专一性识别天冬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-赖氨酸（Asp-Asp-Asp-Asp-Lys，DDDDK）序列，切割赖氨酸羧基端肽键，去除位于蛋白质N-末端的融合蛋白，以除去不需要的融合标签，释放出目的蛋白。重组肠激酶（Recombinant Enterokinase，rEK）是高纯度纯化的牛肠激酶轻链亚基，它与天然提取的肠激酶具有同样特异的切割酶活性，且切割速率更快。
重组肠激酶，采用重组酵母分泌表达，纯度高、活性高，可以在较宽pH范围（pH4.5～9.5）和温度范围（4～45℃）有效切割，不含其它蛋白酶，并且在各种去垢剂和变性剂存在的条件下仍具有部分活性。
重组肠激酶（rEK）被广泛地应用于基因工程产品的开发，例如，作为工具蛋白酶用于重组融合蛋白质的特异性切割，尤其适用于生物工程制药业及基因工程、生物化学、分子生物学等研究。产品特性见表1。
保存方法
-20℃保存，冰袋运输。质保期12个月
使用方法（参考举例）
1. 反应体系构建，以1000 μL为例，反应体系如下：
融合蛋白 | 0.5~1 mg(蛋白浓度：0.1~1 mg·mL-1 ) |
Recombinant Enterokinase重组肠激酶 | 0.5~2.5 uL(相当于2~10U) |
10 x rEK反应缓冲液 | 100 μL |
超纯水 | 根据需要补充体积到1000 μL |
【注】：10× rEK反应缓冲液配方：0.5 M Tris-HCl，pH 8.0（22℃），10 mM CaCl2，1% Tween-20。
2. 25 ℃过夜酶切，可用SDS-PAGE检测酶切效果。
3.（可选）本品具有高活力的重组肠激酶，切割蛋白使用量少，可不考虑去除。后续如需去除重组肠激酶，可用阴离子交换树脂（eg.DEAE-FF）对其进行洗脱。推荐洗脱条件如下：平衡缓冲液：25 mM Tris-HCl，pH8.0；洗脱缓冲液：25 mM Tris-HCl ，pH8.0，含100 mM NaCl。
注意事项
1. 样品溶液含有在>2 mM 尿素，或>250 mM NaCl，或>20 mM β-ME，或>0.1% SDS，或>50 mM咪唑条件下，为获得理想的酶切结果，请先将样品透析到1×反应缓冲液中，然后再进行酶切实验。
2. 磷酸盐对Enterokinase有很强的抑制作用，少量的磷酸盐都会严重影响Enterokinase的活性,因此在酶切体系内不能存在磷酸盐。
来源（Source） | 重组酵母 |
分子量（Molecular Weight） | 理论值25.850 kDa |
外观（Appearance） | 透明液体 |
酶浓度（Enzyme Concentration） | 4 U/uL |
活性定义（Activity Definition） | 在37℃，16小时内将0.5 mg的Thioredoxin-NP-27 95%降解为NP-27所需要的酶量定义为1个活性单位(1U) 。 |
内毒素检测（Endotoxin） | 用LAL法测定内毒素含量小于1 EU·μg-1 |
质量保证（Quality assurance） | 经多次柱纯化，SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带；本制品中不含有非特异性的蛋白酶切活性。 |
特别提示：本公司的所有产品仅用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
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