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pCas-Guide
名称 编号 规格 价格 |
pCas-Guide ZY-61619 2μg 询价 |
英文名称: 运输:常温 保存:-20°C 有效期:两年 货期:一周 其他: 多克隆位点经测序验证 产品介绍: |
空载体与空质粒的区别
载体包括质粒、噬菌体之类很多。
空载体是没有插入外源基因的载体
空质粒是没有插入外源基因的质粒,所以可以说空质粒是空载体,但空载体不一定是空质粒。
pCas-Guide方法:用重组质粒(PLNCX-RI)转化DH5-α感受态细菌,成功转化后以SDS碱裂解法大量制备纯化质粒DNA,同法处理空质粒载体(PLNCX)。通过琼脂糖电泳、紫外分光光度法鉴定R1基因提取的纯度和浓度。
一、载体与质粒的区别
1.载体(Vector)的概念
把一个目的基因通过基因工程手段送到生物细胞(受体细胞),需要运载工具(交通工具)携带外源基因进入受体细胞,这种运载工具就叫做载体(vector)。
基因工程上所用的载体是一类能自我复制的DNA分子,其中的一段DNA被切除而不影响其复制,可用以置换或插入外源(目的) DNA而将目的DNA带入宿主细胞。常用的载体有质粒、噬菌体、病毒等。
2.质粒(Plasmid)的概念
质粒是生物细胞内固有的、能独立于寄主染色体而自主复制、并被稳定遗传的一类核酸分子。质粒常见于原核细菌和真菌中,绝大多数的质粒是DNA型的,少部分为RNA型。天然DNA质粒大都具有共价、封闭、环状的分子结构,其分子量范围:1-300 kb。细菌质粒是基因工程中最常用的载体。
pCas-Guide质粒的基本特征:
质粒的自主复制性:质粒能利用寄主细胞的DNA复制系统进行自主复制,其DNA上的复制子结构决定了质粒与寄主的对应关系,并根据在每个细胞中的分子数(拷贝数)多寡,质粒可分为两大复制类型:
严紧型复制控制的质粒 1 - 3 拷贝
松弛型复制控制的质粒 10 - 60 拷贝
启动子-核糖体结合位点-克隆位点-转录终止信号
启动子-促进 DNA 转录的 DNA 序列,这个 DNA 区域常在基因或操纵子编码序列的上游,是 DNA 分子上可以与 RNApol 特异性结合并使之开始转录的部位,但启动子本身不被转录。
增强子/沉默子-为真核基因组(包括真核病毒基因组)中的一种具有增强邻近基因转录过程的调控顺序。其作用与增强子所在的位置或方向无关。即在所调控基因上游或下游均可发挥作用。
核糖体结合位点/起始密码/SD 序列(Rbs/AGU/SDs):mRNA 有核糖体的两个结合位点,对于原核而言是 AUG(起始密码)和 SD 序列。
转录终止序列(终止子)/翻译终止密码子:结构基因的一个外显子中有一个 AATAAA的保守序列,此位点 down-stream 有一段 GT 或 T 富丰区,这2部分共同构成 poly(A)加尾信号。结构基因的一个外显子中有一个 AATAAA 的保守序列,此位点 down-stream 有一段GT 或 T 富丰区,这2部分共同构成 poly(A)加尾信号。
如何选择pCas-Guide质粒载体
选择载体主要依据构建的目的,同时要考虑载体中应有合适的限制酶切位点。如果构建的目的是要表达一个特定的基因,则要选择合适的表达载体。载体选择主要考虑下述3点:
1.构建DNA重组体的目的,克隆扩增/表达,选择合适的克隆载体/表达载体。
2.考虑载体的类型:
3.载体MCS中的酶切位点数与组成方向因载体不同而异,适应目的基因与载体易于链接,不产生阅读框架错位。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!