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钦诚生物 | 一周
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获取电话本产品主要用于快速提取新鲜或冷冻的动物组织中的基因组DNA。
它具有下列特点:
1. DNA 更加纯净，大多数DNA样品的0D260/280值在1.8-1.9之间。
2. DNA产率- -般在200ug/g左右(跟组织种类密切相关)。
3.可直接用于PCR、酶切、杂交等后续反应。
4.操作更加简单，离心吸附操作代替离心沉淀，整个过程室温操作约10分钟,
适合大规模样品处理。
5.安全无毒，本试剂盒对人体无毒，无腐蚀性和刺激性气味。
6.性价比高，质量和国外同类产品相当，但价格更便宜。
注意:溶液A容易产生沉淀，溶液B十分粘稠，用前均需要在65C水浴中加热使
沉淀溶解或粘稠度降低，用前充分摇匀。
1.根据使 用材料的不同进行下列操作:
a)对贴璧细胞: 吸尽培养液，在每10平方厘米细胞中加入0.8 mL预热的溶液
A，用枪充分吹打以确保细胞全部裂解，然后把裂解液转移到1.5mL塑料离
心管中。
b)对悬浮细胞:离心收集细胞,吸尽液体,在每1-5X106悬浮细胞中加入0.8mL
预热的溶液A，用枪充分吹打以确保细胞全部裂解。然后把裂解液转移到1.5
mL塑料离心管中。如果是fibroblasts或carcinoma细胞，0.8 mL溶液A
的细胞使用量不要超过1X106个细胞。
c)对新鲜或冷冻的组织:先将剪切成小块的新鲜组织或冷冻保存的组织放入10
mL或15mL塑料离心管中，每50-100mg组织加0.8mL预热的溶液A,
用剪切式匀浆器匀浆30秒左右,然后把裂解液转移到1.5 ml塑料离心管中。
对肝、脾、胰、肾等细胞分裂十分旺盛的组织(细胞中含大量正在复制的DNA),.
建议组织的使用量不要超过50mg.
d对DNALOCKER保存组织:先用纸吸去DNALOCKER液体后再剪切成小块，其余
操作同新鲜成冷冻组织的处理。
2. 加入0.4 mL預热的溶液B到裂解液中。由于溶液B十分粘桐，可将1mL枪
头剪掉- - 截再用，也可以用称量方法加0.4 go加入溶液B后需要颠倒数次充
分混匀。
3. 65C水浴5-10分钟。如果室温放置，DNA产量将降低10-20%。
4.加入 0.2mL自备氯仿，振荡器上充分振荡混均30秒，此时溶液将呈乳白色。
一定要确保离心管底的液体被震荡起来。
5.
12000-15000 g室温离心2分钟。上清透明，中间层为白膜(蛋白层)。
6. 小心将上清液平均转移到两个新的离心管中，避免触及中间的白膜。
7.每个管中 加入1.5倍体积的溶液C,充分颠倒混匀。
8. 分两次上柱(即先转移- -半的混合液到离心吸附柱中，室温放置2分钟，
12000-15000 g室温离心半分钟，弃穿透液，然后再将剩下的混合液到离心
吸附柱中，室温放置2分钟，12000-15000 g室温离心半分钟，弃穿透液)。
9. 加0.7 mL通用洗柱液到离心吸附柱中，12000-15000 g室温离心半分钟，
弃穿透液。.
10.加0.3 ml通用洗柱液到离心吸附柱中，12000-15000 g室温离心半分钟，
弃穿透液。.
11. 12000-15000 g室温再离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液
会污染DNA。
12.室温放置半分钟使残留乙醇挥发。
13.将离心吸附柱转移到- 新的1.5 mL塑料离心管中，加入50-100 uLDNA洗
脱液2.0,室温放置离心吸附柱1-2分钟。
14.12000-15000 g室温离心半分钟，离心管中溶液即为DNA样品，可以立即
使用或存放于冰箱待用。