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钦诚生物 | 一周
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获取电话石蜡包埋组织本是珍贵的分子生物学研究材料，但是由于它们的保存时间一般
都比较长，很不容易从中提取到可以进行PCR的RNA,存在的主要问题是RNA
的降解和脱蜡过程中样品的丢失。本产品是专门用于从甲醛和非甲醛固定的石蜡包
埋组织中快提RNA (包括miRNA)的试剂，具有下列特点:
1.一管式操作，避免了可能的交叉污染和样品RNA的丢失。
2.含一步离心 式脱蜡试剂，不需要使用有毒的二甲苯，健康环保。
3.能有效去除 基因组DNA的污染，得到的RNA可直接用于RT-PCR反应。
4.即开即用， 客户自己不需要准备额外的试剂。
使用方法
1.将5片厚度为6-8 um的石蜡包埋组织切片转移到1.5 mL塑料离心管(
使用螺旋盖离心管)中并加入1 mL溶液A,在振荡器上以大速度振荡10秒。
2.
加入75 ulL溶液B,在振荡器.上以大速度振荡10秒。
3.7000Xg 室温离心2分钟，溶液将形成两个相，其中组织切片位于下相。
4. 小心吸弃上层液体。
5.将离心管放 入真空抽干机中抽干下层的液体，- - 般需要- -小时 。
6.
加入150uL溶液C,55C保温过夜。
7. 短暂离心，95C保温10分钟。
8.加入0.5 mL溶液D，充分震荡半分钟。
9.加入0.1 mL自备氯仿，振荡器上充分振荡混均30秒。
10.13000-5000Xg 室温离心3-5分钟。
11.将上清液(约0.6 mL)转移到另一千净的1.5 mL塑料离心管中。下层有机
相(蓝色)和中间层含有DNA和蛋白质,避免触及，否则将产生蛋白质和DNA
污染。为保险起见，可以留下100uL上清液不取。同时吸取上清时缓慢
进行，否则容易吸出交界面的不可见的DNA.
12.在上清液中加入两倍体积的微量核酸沉淀剂，振蔼器上振荡30秒混匀，
13.13000-15000 g室温离心5分钟，离心底的侧面将形成RNA沉淀。如果需
要提高RNA回收率，可以将离心时间延长到20成30分钟。
14.小心吸弃上清液，注意不要吸弃RNA沉淀。
15.在含RNA沉淀的离心管中加入1mL自备的75%乙醇，振荡混匀30秒。
16. 13000-15000 g室温离心1分钟。
17.小心吸弃上清液，注意不要吸弃RNA沉淀。
18.短暂快速离心，用移液枪小心吸弃残留乙醇(约50 uL)。注意不要吸弃沉淀。
此步十分重要，否则残留的乙酌会影响RNA的使用。
19.室温放1-2分钟后立即加入50-100 uL RNA溶解液使RNA沉淀溶解。千万
不要用真空离心法使RNA沉淀过于干燥，否则RNA将变得十分难溶。样晶立
即使用成存放于80C待用。
20. RNA完整性的电泳检测:
21. RNA产量产率测定:将5-10山RNA溶于TE级冲液中(pH7.5-8.2之间检
测其在0D260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的
RNA= 40 ug/mL) ,进而计算出RNA的产量(浓度x体积)和产率(RNA产量/
组织用量)。
22. RNA纯度测定:无污染的总RNA的OD260/0D280- 般在1.8-2.1之间(具
体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关),高于此范围则分别表示样品
可能有蛋白质污染，但-一般不影响RT-PCR等反应。