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农杆菌AGL1化学感受态细胞
E.coli AGL1 Chemical Competent Cell
AGL1菌株为C58,RecA型背景,核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif和羧苄青霉素抗性基因carb,为了便于转化操作,此菌株携带一无自身转运功能的琥珀碱型Ti质粒 pTiBo542DT-DNA,此质粒含有vir基因(vir基因是T-DNA 插入植物基因组必需的元件,pTiBo542DT-DNA质粒自身的T-DNA转移功能被破坏,但可以帮助转入的双元载体T-DNA 顺利转移)。
?本产品为AGL1 农杆菌化学感受态细胞,适用于水稻、杨树、拟南芥等植物的转基因操作,经pCAMBIA2301质粒检测转化效率高达103cfu/μg。
基因型:C58 RecA(rifr/carbr)Ti pTiBo542DT-DNA Succinamopine。
储存条件:干冰运输、-80℃保存,有效期一年。
自备试剂:质粒DNA、液氮等
使用方法:
转化前准备
1. 冰水浴和37℃水浴。
2.液氮或干冰/乙醇混合物。
3. 将抗性平板在28℃培养箱中平衡至少15分钟。
转化方法
1. 取-80℃保存的农杆菌感受态细胞于室温或手心片刻待其部分融化,处于冰水混合状态时插入冰中。
2. 无菌条件下,向刚刚融化的感受态细胞悬液中加入需要转化的质粒,每100μL感受态细胞加1μg(体积不大于10μl)质粒DNA,轻柔混匀。冰水浴中静置5分钟。
3. 将离心管置于液氮中速冻5分钟(注:也可以用干冰和无水乙醇混合物替代液氮)。
4. 迅速将离心管置于37℃水浴静置中5分钟,不要晃动水面。然后快速转至冰水浴中静置5分钟。
5. 加入800μl 无抗生素的2×YT或LB液体培养基,28-30℃振荡培养2~3小时。使菌体复苏,表达抗性。
6. 5000rpm离心1分钟收菌,保留100μl左右上清,轻轻吹打重悬菌体,均匀涂布到含有相应抗生素的LB 固体培养基平板上,待平板中的液体完全吸收后,倒置平板,28-30℃培养48-72小时。(注:当平板只含有50μg/mLkan时,28℃培养48小时即可;平板中同时加入50μg/mL kan,20μg/mL rif时,需28℃培养60小时;如果使用的平板含有50μg/mL rif 则需要28℃培养72-90小时)。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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