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DNA磷酸化试剂盒
DNA Phosphorylation Kit
人工合成的PCR引物、linker和adaptor的5′端一般都是-OH基团而不是-PO4基团(除非额外付费要求在人工合成时加上-PO4基团),而任何DNA连接酶都不能将一个DNA分子5′端的-OH基团和另一个DNA分子3′端的-OH基团进行连接,因此通过人工合成的DNA片段和天然DNA 之间的连接效率一般都比天然DNA 彼此的连接效率低(天然DNA 4个端口均可连接,人工合成的DNA跟天然DNA 有2个端口可以连接,人工合成的DNA之间没有任何端口可以连接),尤其是在平末端连接时。本公司开发的DNA 磷酸化产品能将DNA分子5′端的-OH基团磷酸化。
产品特点:
1.可以快速把DNA的5′端的-OH基团变成-PO4基团,使人工合成的DNA(包括PCR产物)跟天然DNA一样有高的连接效率。
2. 既可以对单链DNA进行磷酸化处理,也可以对双链DNA片段同时磷酸化处理。
3.处理后的DNA可以直接用于连接反应、克隆等,不需要纯化。
4. 本产品足够20次DNA的磷酸化实验。
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期为6个月。
使用方法:
一:双链DNA片段(5′端为-OH基团的)的磷酸化
注意:如果是PCR产物,一定要先胶回收,不能使用没经过纯化的PCR反应液,因为其中的残留PCR引物会耗掉大量的激酶,降低PCR产物的磷酸化效率。
1、在微量离心管中配制下列反应液(20μL):
2、37℃反应30分钟。
3、70℃热处理5分钟,灭活酶。
4、可直接用于后续克隆(加入量不要超过总体积的1/5)。
二:单链DNA片段的磷酸化
注:单链DNA 包括局部双链的DNA。引物,linker,adaptor,Oligo探针等均按此操作处理。
5、在微量离心管中配制下列反应液(20μL):
6、37℃反应30分钟。
7、70℃热处理5分钟,灭活激酶。
8、可直接用于后续克隆(加入量不要超过总体积的1/5)。如果使用浓度高,则可能需要乙醇沉淀法浓缩DNA。如果单链DNA的浓度低于5pmol,还需要在乙醇沉淀时加入核酸助沉剂。沉淀得到的DNA可溶解在适量的水中。
附:乙醇沉淀浓度DNA(本试剂盒不提供相关试剂,下列操作仅供参考:
1、在DNA溶液中加入0.1倍体积的3 M 乙酸钠溶液(pH5.2)。
2、再加入2.5倍体积的无水乙醇和4uL 核酸助沉剂。
3、混匀后12000g 4℃离心10分钟,小心弃上清。
4、加入1mL 70%乙醇,短暂离心3分钟后小心弃上清。
5、短暂离心5秒,吸弃残留液体(约30-50μL)。
6、室温放置2分钟干燥后加入适量的超纯水溶解DNA,立即使用或放-20℃长期保存。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!