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一管式双链cDNA合成试剂盒

一管式双链cDNA合成试剂盒

价格: 690

品牌:泽叶生物

供货周期: 现货

货号:ZY630308-10

规格:10次

核酸扩增.jpg

一管式双链cDNA合成试剂盒

One-Tube double-stranded cDNA Synthesis Kit

本产品是用于一管式双链cDNA合成的试剂盒。cDNA第一链合成的原理是以OligodT为通用引物的、MMLV催化的逆转录反应。其原理如下:
cDNA第一链合成的原理

cDNA第二链合成的原理是用RNase H使RNA-DNA杂合链中的RNA产生切口,再用DNA Polymerase I通过切口平移(nick translation)反应进行RNA链取代合成cDNA第二链,其原理图如下:
cDNA第二链合成的原理

产品特点:
1. 即开即用,含有合成两条cDNA链的所有试剂。
2.适用于含poly rA的RNA,对不含poly rA的RNA(如细菌RNA),不能使用本试剂盒制备ds cDNA。
3.一管式进行,第一链cDNA合成后不需要任何处理,直接进入第二链的合成。
4. 所得双链cDNA可以直接用于后续的常规PCR、real-time PCR、cDNA文库构建、抑制性差减杂交等。
5. 本试剂盒足够10次80μL体系的双链cDNA合成反应。
6. 如果需要合成全长cDNA,最好选用SMART全长cDNA双链合成试剂盒。

试剂盒组成:

成分规格
Oligo dT引物10μl
cDNA第一链合成缓冲液40μl
MMLV 逆转录酶(200U/μL)10μl
5×cDNA 第二链合成缓冲液160μl
20×cDNA 第二链合成酶混合液40μl
T4 DNA聚合酶20μl
0.2 M EDTA溶液40μl
超纯水1ml
说明书1份



储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。

使用方法:

一:mRNA的制备
本试剂盒不提供mRNA提取试剂,用户需自备相关试剂。

二:双链cDNA的合成
1.在一个干净的塑料离心管中,按下表设置cDNA合成反应:

成分用量
自备mRNA样品4μl(0.5-2μg)
Oligo dT引物1μL
70℃ 2分钟后室温放置2分钟,短暂离心
cDNA 第一链合成缓冲液4μL
MMLV 逆转录酶1μL
轻柔吹打混匀后42℃保温90分钟合成第一链cDNA
超纯水48μL
cDNA 第二链合成缓冲液16μL
cDNA 第二链合成酶混合液4μL
轻柔吹打混匀后,短暂离心,16℃保温2小时
自备的T4 DNA聚合酶2μL
轻柔吹打混匀后,16℃继续保温30分钟
0.2M EDTA溶液4μL


注:如果不需要将双链cDNA平末端化,则可以跳过T4 DNA聚合酶处理步骤。
2.电泳5μL检测cDNA质量。如果cDNA在0.5-10Kb的范围内呈模糊一片,则cDNA合格。如果没看见cDNA或有其他异常,需查找原因后再继续。
3. 所得cDNA可以直接用于后续的常规PCR、real-time PCR、cDNA 文库构建、抑制性差减杂交等实验。


特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!





生化试剂 一管式双链cDNA合成试剂盒由上海泽叶生物科技有限公司为您提供,如想了解更多关于生物分子 一管式双链cDNA合成试剂盒的报价、规格、厂家等信息,欢迎来电或留言咨询。除供应一管式双链cDNA合成试剂盒外,上海泽叶生物科技有限公司还可为您提供: 彩色预染蛋白Marker(10-180 kDa,三色)、 Super GelBlueTM 核酸染料, 10,000× in water 、 彩色预染蛋白Marker(10-180 kDa,三色)
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