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2X 探针法qPCR Mix （TaqMan探针法荧光定量PCR试剂盒）
2×Probe qPCR Mix
产品及特点 本产品是基于荧光探针检测的即用型 PCR 试剂盒，可以对靶片段进行实时定量 PCR 分析（quantitative PCR、qPCR）。产品含有经过优化的缓冲液组分、热启动 Taq DNA 聚合酶、Taq DNA 稳定剂、dNTPs、MgCl2和稳定剂等所有实时定量 PCR 所需要的成分，用户只需加入基因组 DNA 或 cDNA 模板、引物和探针即可进行探针法实时定量 PCR 反应，具有广泛的用途。本产品具有下列特点：
1. 以 2×Mix 提供，用户只需准备模板、引物、探针和 ROX 染料（取决于 qPCR 仪器）即可以进行探针法实时定量 PCR 实验，非常方便快捷，降低了操作误差。
2. 各成分的浓度和比例都经过精心优化，反应的灵敏度高，特异性强。灵敏度最高时可以达到 50 拷贝/反应（跟模板质量，引物设计等相关）。
3. 既可用于 TaqMan 探针 qPCR，也可以是分子信标（molecular beacon）探针 qPCR。
4. 灵敏度和专一性比染料法荧光定量 PCR 更高。
5. 可用于基因表达分析、SNP 分析、拷贝数分析等实验。也可以用于定性检测。
6. 本产品只能用于科研，1mL 足够 100 次 20uL 体系的探针法 qPCR 反应。
运输及保存 低温运输，-20℃保存, 不冻融时保存期限为 24 个月。如果需要每天使用，可在 4℃放置三
周。
自备试剂 DNA 模板、引物、超纯水。
使用方法
1. 如果有 N 个样品并且做定量分析，最好设置 N+7 个反应，多出的 7 个中，6 个是做标准曲线的阳性对照，一个是阴性对照（NC）。在 N+7 个 PCR 管中，加入下列成分。如果是做定性分析，则 6 个做标准曲线的样品缩减成一个阳性对照（PC），用户自己需要根据下表进行适当修改（把 6 个标曲反应改成 1 个阳性对照反应）。
成分 N 个样品管
6 个标准
曲线管
NC 管
2×探针法 qPCR MagicMix 各 10 uL 各 10 uL 10 uL
自备引物 1（10uM） 各 1 uL 各 1 uL 1 uL
自备引物 2（10uM） 各 1 uL 各 1 uL 1 uL
自备模板 DNA
基因组 DNA 10-100ng 不加 不加
或 cDNA 1-10ng 不加 不加
自备阳性对照模板（6 各梯度） 不加 各 1 uL（各
加 1 个梯度） 不加
阴性对照模板（一般用水） 不加 不加 1 uL
自备探针（0.5uM） 各 1 uL 各 1 uL 1 uL
自备 50×自备 ROX I 或 ROX II
染料（见注）
各 0.4 uL 各 0.4 uL 0.4 uL
补超纯水到 20 uL 20 uL 20 uL
注，下列信息仅供参考，具体以 qPCR 仪器的使用手册为准。
1、不需要 ROX 的机型：Agilent MX3000 和 MX4000、iCycler IQ、LightCycler 480、，、Smart Cycler System、Thermal Cycler Dice Real Time System 等型号的荧光 PCR 仪器不需要加 ROX 染料，但加入的话也不会影响整个 PCR 分析。
2、需要使用 ROX I 的机型：ABI Prism7000、7300、7700、7900HT、Step One、Step One Plus。
3、需要使用 ROX II 的机型：ABI Prism7500、7500 Fast、MJ Opticon、MJ Chromo4、Corbett RotorGene 3000。
2. 放入荧光 PCR 仪中进行扩增, 下表的扩增参数仅供参考，一定需要根据靶分子长度，引物和探针的 Tm 值、标记染料的种类等进行调节。一般选择三步法 PCR：步骤 反应参数 备注
预变性 94℃ 2 分钟
PCR（35-45 次循环）
94℃ 15 秒
靶分子 长 度 最 好 在
80-200bp
55-65℃ 15-30 秒
在此步采集荧光信号，通
道根据标记染料决定
72℃ 30 秒
如果引物 Tm 值接近 60℃，也可以选择两步法 PCR：
步骤 反应参数 备注
预变性 94℃ 2 分钟
PCR（35-45 次循环）
94℃ 15 秒
靶分子 长 度 最 好 在
80-200bp
60℃ 60 秒
在此步采集荧光信号，通道根据标记染料决定
3. 数据处理
如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 DNA 浓度的 log 值，再推算出其浓度。
如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性。一般情况下，阴性对照 Ct 大于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct 值应该小于或等于 30。对待测样品，如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性，如果小于或等于 35 则为阳性。如果在 35-40 之间，则重复一次。重复实验的 Ct 值如果大于或等于 40 则为阴性，如果小
于 40，则为阳性。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
