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柱式葡萄球菌RNA提取试剂盒(柱式葡萄球菌RNAout)
Staphylococcus RNA Column extraction kit
产品及特点 分枝杆菌属(Mycobacterium)是极为古老的细菌,与人类的疾病相关的就有
25 种以上,包括引起结核病的结核分枝杆菌(Mycobacteria tuberculosis)。近年来由于多重耐药性分枝杆菌的出现,分枝杆菌再次成为人们关心的细菌。PCR快速诊断是目前检测分枝杆菌的主流方法,但由于此类细菌具有十分独特的坚硬的细胞壁,快速提取其基因组 RNA 一直是十分棘手的技术问题。具有下列特点:
1. 操作简单,客户不需要准备额外的试剂。
2. PCR 检测灵敏度一般在 10-100 CFU/mL 样品。
3. 既可以使用培养的细菌,也可以使用痰液、精液、血液、脑脊液等样品。
4. 价廉物美,与国外同类产品相比质量相当,但价格便宜。
5. 安全无毒,本试剂盒对人体无害,无腐蚀性和刺激性气味。
6. 本产品只能用于科研。
运输及保存 常温运输及保存,但化痰液成分(干粉)需要低温运输、-20℃保存,有效期一年。
自备试剂 TE 缓冲液,氯仿。
使用方法 注意:试验所用的实验室环境、耗材等均需要 RNase-free。
一: 培养的分枝杆菌样品的预处理
1. 刮取培养的分枝杆菌到 0.5 mL 自备 TE 缓冲液中。
2. 80℃放置 20 分钟以杀灭细菌。
3. 3000 g 室温离心 15 分钟,弃上清。
4. 将细菌沉淀放-20℃冰箱备用或直接进入细菌基因组 RNA 提取步骤。
二: 含分枝杆菌的痰液样品的预处理
1. 将痰液样品(0.5mL-2mL)加入到干净的 10 mL 或 15 mL 塑料离心管中。
2. 加 2mL 的自备蒸馏水,在加入 100mg 化痰液干粉,充分混合均匀后室温放置 15-30 分钟。如果痰很浓,可以延长保温时间。
3. 3000 g 室温离心 15 分钟,弃上清。
4. 将细菌沉淀放-20℃冰箱备用或直接进入细菌基因组 RNA 提取步骤。
三:分枝杆菌菌基因组 DNA 的提取
1. 向上述有分枝杆菌沉淀的离心管中加入 0.3mL 溶液 A,用枪充分吹打细菌沉淀,确保细菌全部裂解,没有块状物。此时裂解物总体积 0.4mL。加入约 0.2倍体积的自备氯仿(10.4mL 裂解物需 0.1 mL 氯仿),振荡器上充分振荡混均30 秒。
2. 12000-15000 g 室温离心 3 分钟。将上清液(约 0.3mL)转移到离心吸附柱中。注意:离心后下层有机相和中间层含有 DNA 和蛋白质,避免触及,否则将产生蛋白质和 DNA 污染。
3. 加入等体积(约 0.3mL)的溶液 B,充分混匀后全部上柱。
4. 12000-15000 g 室温离心半分钟,弃收集管中的穿透液。
5. 加 0.7 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中,室温离心半分钟,弃收集管中的 穿透液。一次洗涤一般足够去除杂质。但如果样品 OD260/280 比值不高,可以再用 0.3 mL 通用洗柱液重复此步一次。
6. 室温 12000-15000 g 离心半分钟。此步十分重要,否则残留的通用洗柱液会影响 RNA 的使用。
7. 将离心吸附柱转移到一自备的 RNase-free 收集管中,加入 30-100uL RNA洗脱液,室温放置两分钟。
8. 室温离心半分钟,离心管中溶液即为 RNA 样品,可以立即使用或存放于-80℃待用。
9. RNA 完整性的电泳检测:如果需要做 Northern 杂交,强烈建议用户使用甲醛变性胶进行 RNA 电泳,因为非变性胶不能分离所有的 RNA 分子。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!