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柱式软骨RNA提取试剂盒（柱式软骨RNAout）
Column Cartilage RNAOUT
产品及特点 本产品专门从各种软骨组织样品中快速提取总 RNA 的试剂盒，它能有效克服传统 TRIzol 方法提取软骨组织 RNA 时，十分容易产生糖蛋白和酸性多糖污染这一缺点。
1. 能有效去除糖蛋白、粘蛋白污染，OD260/280 一般均在 1.9 以上。
2. RNA 产率一般为 5-15 ug/100 mg。
3. 操作简单，整个提取过程一般只需要 10 多分钟。
1. 得到的 RNA 可以直接用于 RT-PCR、Northern 杂交、mRNA 纯化、Primer Extension、RNA Protection、in vitro translation 等研究。
运输及保存 常温运输和保存，有效期一年。溶液 B 4℃保存。
自备试剂 氯仿。
使用方法 1. 先将 50-200 mg 新鲜或冷冻的软骨组织液氮研磨成粉，加入 1 mL 溶液A 溶解（溶液 A 使用前必须放在 65℃水浴使沉淀彻底溶解并摇晃混匀），然后将研磨物转移到新的 1.5 mL 离心管中, 振荡混合 30 秒。也可以将软骨组织剪碎后与溶液 A 一起用 Polytron 匀浆机(内切式匀浆机)匀浆5-20 秒，再转移到 1.5 mL 离心管中。匀浆时会产生泡沫，但不影响提
取效果。
2. 在离心管中加入 0.3 mL 的溶液 B 和 0.2 mL 自备氯仿，在振荡器上振荡30 秒混匀，此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
3. 室温 12000-15000 g 离心 3-5 分钟，两相间将有约 5-10 毫米厚的细胞破碎物。
4. 将上清液(约 0.6 mL)转移到另一干净的 1.5 mL 塑料离心管中，下层有机相和中间层含有 DNA、蛋白质和其他杂质，避免触及或吸取。最好留下100 uL 上清液不取。
5. 加入等体积的溶液 C，充分颠倒混匀。
6. 将一半的溶液转移到离心吸附柱中，12000-15000 g 室温离心半分钟，弃穿透液。
7. 将剩下的一半溶液转移到同一离心吸附柱中，12000-15000 g 室温离心半分钟，弃穿透液。
8. 加 0.7 mL 通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。
9. 加 0.3 mL 通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。此步可以省略。
10. 室温离心半分钟。此步十分重要，否则残留的乙醇会影响 RNA 的使用。
11. 将离心吸附柱转移到自备的 RNase-free 离心管中，加入 50-100 uL RNA洗脱液，室温放置 1-2 分钟。
12. 12000-15000 g 室温离心半分钟，离心管中溶液即为 RNA 样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
13. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做 Northern 杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行 RNA 电泳，因为非变性胶不能分离所有的 RNA 分子（BioTechniques，28：414，2000）。
14. RNA 产量产率测定：将 5-10 μL RNA 溶于 TE 缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度（1 OD260的 RNA=40 μg/mL），进而计算出 RNA 的产量（浓度 X 体积)和产率(RNA产量/组织用量)。注意：测定 OD 时不要稀释过度，否则浓度会在仪器能测的范围之外。本方法提取的 RNA 测 OD 时一般最多只能稀释 10-20 倍。
15. RNA 纯度测定：无污染的总 RNA 的 OD260/OD280 一般在 1.8-2.1 之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响 RT-PCR 等反应
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
