(1)抗体药物早期发现
鼠源抗体
嵌合抗体
人源化抗体 (CDR移植,定点突变)
双特性抗体(e.g. CD3, PDL-1)
抗体片段(e.g. ScFv, Fab)
(2)表达纯化
重组蛋白表达 Ecoli, CHO
蛋白偶联标记:生物素、酶或荧光偶联
杂交瘤抗体少量制备:体外(转瓶)或体内(腹水)
抗体纯化:抗原亲和吸附、离子交换、Protein A/G/L
抗体生产:瞬时转染 HEK293, CHO,稳转细胞株构建
(3)单抗,多抗,及双抗
基因密码子修饰,表达纯化
多动物种属:SPF级小鼠、兔、豚鼠
AAALAC 动物设施
弗氏佐剂免疫,快速免疫
细胞融合及亚克隆筛选
杂交瘤抗体可变区测序分析
双抗构建 iPhaseCross平台技术
(4)鉴定及鉴别
含量分析(UV-Vis A280, BCA)
纯度:SDS-PAGE, HPLC
抗体亚型鉴定
种属特异性
结合活性/亲和力: EC50, KD, Kd, Ka (ELISA,BlitZ)
双特异性抗体结合活性
中和活性:IC50
(5)抗药性抗体ADA
免疫方法开发
筛选试验
确证试验
滴度试验
中和试验
试剂盒定制生产
(6)生物活性及功能
ADCC和 CDC试验
细胞迁移, 细胞增殖, 细胞毒性试验
细胞因子激活试验
信号转导,蛋白磷酸化试验
报告基因检测
双特异性抗体的结合试验
靶点选择性
体内PD和PK研究:大鼠,小鼠,犬,猴