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pVL1392昆虫胞内质粒

pVL1392昆虫胞内质粒

价格: 980

品牌:钦胜生物

供货周期: 现货

货号:QSP0297

规格:2UG

pVL1392昆虫胞内质粒

 

基本信息

 

启动子: Polyhedrin

复制子: ColE1 ori

终止子: polyhedrin 3

质粒分类: 昆虫细胞杆状病毒组成型表达质粒

质粒大小: 9032bp

原核抗性: 氨苄青霉素Ampicillin

克隆菌株: DH5α

培养条件: 37℃,有氧,LB

表达宿主: 昆虫细胞

诱导方式: 组成性表达,无需诱导

5'测序引物: Polyhedrin-F:AAATGATAACCATCTCGC

3'测序引物: Polyhedrin-R:GTCCAAGTTTCCCTG

 

质粒简介

     pVL1392 and pVL1393 are 9.8 kb vectors designed for use as baculovirus transfer vectors. These transfer vectors contain recombination sequences which are homologous to sequences in the baculovirus genome.Upon cotransfection, these sequences undergo homologous recombination resulting in a recombinant viral genome packaged in infectious viral particles.

     These vectors are nonfusion vectors, which provide the AcMNPV polyhedrin enhancer-promoter sequences to drive high expression, and a multiple cloning site, conveniently constructed in opposite orientations, for simple subcloning. Translation initiation sequences must be provided by the inserted cDNA.

        • Multiple cloning site polylinker, positioned in opposite orientations

        •  Recombination sequences for insertion into the baculovirus genome

        • Polyhedrin enhancer-promoter sequences for high expression of recombinant protein Features for growth and maintenance in E. coli:

        • Ampicillin gene for selection

        • pMB1 origin of replication from pUC19 for high copy number growth..   

 .

 


质粒图谱

 

扩增流程
         收到产品后,请先根据产品管壁标签来判断产品形式,并在扩增前准确查找该质粒的抗性、感受态和培养温度。
        1、质粒干粉(请务必转化挑单克隆重提后使用)
        ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl 无菌水溶解质粒;
        ②2μl质粒加至100μl 感受态中,冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min
(从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作)

        ③加入500μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡培养45min

        ④10μl100μl复苏液,并分别涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
(可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布,可以比传统涂布方法获得更多转化子)

        ⑤将平板正向培养1h,再倒置37度培养16h。如果要求是30度则培养20h
(如果菌落过多,请将质粒稀释后再转化。如果无菌落,请加入10μl质粒离心全涂转化)

        ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

        2、甘油菌:四区划线后挑单菌落培养,酵母菌需要先液体复苏再四区划线,再挑单菌落液体培养。

        3、穿刺菌:穿刺接种,液体培养后四区划线,再挑单菌落液体培养。

        4、平板:直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒:单独提取的液体质粒收到后可直接使用。

 

 

 

 

 

 





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