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仪器信息网试剂标物生化试剂生物分子 pPIC9毕赤酵母质粒

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上海钦胜生物科技有限公司

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pPIC9毕赤酵母质粒

价格：￥ 980

品牌：钦胜生物

供货周期：现货

货号：QSP0213

规格：2UG

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pPIC9毕赤酵母质粒

基本信息

启动子: AOX1

复制子: pBR322 ori

质粒分类: 酵母系列，毕赤酵母表达载体

质粒大小: 8023bp

原核抗性: Amp

筛选标记: HIS4

克隆菌株: DH5α

培养条件: 37℃，有氧 LB

表达宿主: 酵母细胞

5'测序引物: AOX5:GACTGGTTCCAATTGACAAGC

3'测序引物: AOX3:GGCAAATGGCATTCTGACAT

质粒简介

pPIC9是一个鉴定多拷贝基因插入到毕赤酵母基因组中的载体。1.pPIC9载体大小8,023 bp，是融合表达载体。2.载体构建过程中，可供使用的单一限制性内切酶位点为Xho I, SnaB I, EcoR I, Avr II, Not I. 3.利用alpha因子分泌信号肽，分泌表达蛋白基因。4.在载体构建过程中，你的基因必须保证与信号肽的起始密码子的读码框一致。5.毕赤酵母中利用HIS4进行筛选。6.为了将基因插入GS115或KM71的AOX区, 使用SacI限制性内切酶线性化质粒(GS115中产生His+Mut+基因型，KM71中产生His+ MutS基因型) 7..为了将基因插入GS115或KM71的His4区, 使用Sal I或者Stu I限制性内切酶线性化质粒(GS115中产生His+ Mut+基因型，KM71中产生His+ MutS基因型) 8.将基因插入GS115的AOX1区域，需要使用Bgl II线性化质粒 (产生His+MutS基因型)。

质粒图谱

扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（请务必转化挑单克隆重提后使用）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl 无菌水溶解质粒；
②取2μl质粒加至100μl 感受态中，冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）

③加入500μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；

④取10μl、100μl复苏液，并分别涂布至目标质粒抗性的LB平板上；
（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）

⑤将平板正向培养1h，再倒置37度培养16h。如果要求是30度则培养20h；
（如果菌落过多，请将质粒稀释后再转化。如果无菌落，请加入10μl质粒离心全涂转化）

⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

2、甘油菌：四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。

3、穿刺菌：穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。

4、平板：直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒：单独提取的液体质粒收到后可直接使用。

生化试剂 pPIC9毕赤酵母质粒由上海钦胜生物科技有限公司为您提供，如想了解更多关于生物分子 pPIC9毕赤酵母质粒的报价、规格、厂家等信息，欢迎来电或留言咨询。除供应pPIC9毕赤酵母质粒外，上海钦胜生物科技有限公司还可为您提供：

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