供应商免费入驻

仪器信息网试剂标物生化试剂生物分子 pGAPZA毕赤酵母质粒

耗材通第 2 年

上海钦胜生物科技有限公司

认证：工商信息已核实

厂商展位

找不到产品？留下需求帮您找

一键询价

pGAPZA毕赤酵母质粒

价格：￥ 980

品牌：钦胜生物

供货周期：现货

货号：QSP0217

规格：2UG

一键咨询

获取电话

详细信息

详细信息

pGAPZA毕赤酵母质粒

基本信息

启动子: GAP

复制子: pUC ori

终止子: AOX1 TT

质粒分类: 酵母系列，毕赤酵母表达载体

质粒大小: 2884bp

质粒标签: C-Myc, C-His

原核抗性: Zeo

筛选标记: Zeo

克隆菌株: DH5α

培养条件: 37℃，有氧 LB

表达宿主: 酵母细胞

培养条件: 28℃，YPD

诱导方式: 无须诱导，瞬时表达

5'测序引物: pGAP-F:GTCCCTATTTCAATCAATTGAA

3'测序引物: AOX3:GGCAAATGGCATTCTGACAT

质粒简介

甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）的酶在许多生物细胞中包括毕赤酵母，稳定高水平表达。最近，GAPDH蛋白编码基因启动子（GAP）被深入研究，并在毕赤酵母中能够高水表达重组蛋白，这取决于使用的碳源（Waterham等人，，1997）。GAP启动子（PGAP）的重组蛋白表达水平略高于AOX1启动子。

pGAPZ A，B，和C载体（2.9 KB）和pGAPZα，B，和C（3.1 KB）载体使用GAP启动子在毕赤酵母中稳定表达重组蛋白。重组蛋白表达为为带有C-末端myc抗原表位和C端His标签的融合蛋白。此外，pGAPZα表达的融合蛋白在N-端带有酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）的α-因子分泌信号肽。这两个系列的载体都提供三个不同读码框的载体，以方便克隆的带有C-端标签和/或N-末端分泌信号肽的载体中。这些载体是基于显性选择标记，Zeocin（博莱霉素）的筛选标记可以同时使用于毕赤酵母和大肠杆菌。

质粒图谱

扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（请务必转化挑单克隆重提后使用）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl 无菌水溶解质粒；
②取2μl质粒加至100μl 感受态中，冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）

③加入500μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；

④取10μl、100μl复苏液，并分别涂布至目标质粒抗性的LB平板上；
（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）

⑤将平板正向培养1h，再倒置37度培养16h。如果要求是30度则培养20h；
（如果菌落过多，请将质粒稀释后再转化。如果无菌落，请加入10μl质粒离心全涂转化）

⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

2、甘油菌：四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。

3、穿刺菌：穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。

4、平板：直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒：单独提取的液体质粒收到后可直接使用。

生化试剂 pGAPZA毕赤酵母质粒由上海钦胜生物科技有限公司为您提供，如想了解更多关于生物分子 pGAPZA毕赤酵母质粒的报价、规格、厂家等信息，欢迎来电或留言咨询。除供应pGAPZA毕赤酵母质粒外，上海钦胜生物科技有限公司还可为您提供：

推荐专场