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仪器信息网试剂标物生化试剂生物分子 pBudCE4.1-hrGFP哺乳双框质粒

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上海钦胜生物科技有限公司

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pBudCE4.1-hrGFP哺乳双框质粒

价格：￥ 980

品牌：钦胜生物

供货周期：现货

货号：QSP0168

规格：2UG

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pBudCE4.1-hrGFP哺乳双框质粒

基本信息

启动子: CMV promoter,EF1-α promoter

复制子: SV40 ori，ori

终止子: bGH poly(A) signal

质粒分类: 哺乳系列质粒；哺乳表达质粒；哺乳双框质粒

质粒大小: 5303bp

质粒标签: C-His,C-V5

原核抗性: 博来霉素Zeo（50μg/ml）

筛选标记: 博来霉素Zeo

克隆菌株: DH5α等大肠杆菌

培养条件: 37℃，有氧，LB

表达宿主: 293T等哺乳细胞

培养条件: 37℃，5%CO2

诱导方式: 无需诱导，瞬时表达

5'测序引物: CMV-F（CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG） EF-1a- F (TCAAGCCTCAGACAGTGGTTC)

3'测序引物: Bleo-R（CTGGATGATCCTCCAGCGC） BGH（TAGAAGGCACAGTCGAGG）

质粒简介

pBudCE4.1-hrGFP质粒是在pBudCE4.1载体中克隆进hrGFP绿色荧光基因。pBudCE4.1质粒使用时，E.coli 克隆菌株时最好使用不含Tn5基因的菌株，如TOP10和DH5αT1；采用电转法时最好用TOP10，博来霉素Zeocin 工作浓度推荐25 μg/ml ~50 μg/ml。

pBudCE4.1 载体设计用于从哺乳动物细胞中的单个载体独立表达两个基因。使用 pBudCE4.1 来产生稳定的哺乳动物表达细胞系可确保细胞中每个基因的拷贝数相等。这可以消除由于基因拷贝数的差异导致的表达变化。pBudCE4.1 可提供具有下列特征的表达盒：

• 用于高水平转录基因的 CMV，可选择用于进行快速检测的 c-myc 表位标签和用于进行简单纯化的 6xHis 序列

• 用于高水平表达基因的 EF-1α 启动子，可选择用于快速检测的 V5 表位标签以及用于简单纯化的 6xHis 序列

• 用于在哺乳动物细胞和大肠杆菌 (E. coli ) 中使用选择剂 Zeocin 进行高效选择的Sh ble (ZeoR) 基因

pBudCE4.1 is a 4.6 kb vector designed for simultaneous expression of two genes in mammalian cell lines. The vector contains the human cytomegalovirus (CMV) immediate-early promoter and the human elongation factor 1α-subunit (EF-1α) promoter for high-level, constitutive, independent expression of two recombinant proteins (see page 13 for more information on the EF-1α promoter). Features of the vector allow detection and purification of expressed proteins (see pages 15–16) for more information). High-level stable and transient expression studies can be carried out in most mammalian cell types. In addition to the two promoters, the vector contains the following elements:

• C-terminal peptides encoding the myc (c-myc) epitope or the V5 epitope and a polyhistidine (6xHis) metal-binding tag for detection and purification of recombinant proteins

• Zeocin™ resistance gene for selection in E. coli and creation of stable, mammalian cell lines (Mulsant et al., 1988) (see pages 18–19 for more information)

• SV40 origin for episomal replication in cell lines that are latently infected with SV40 or that express the SV40 large T antigen (e.g., COS7) pBudCE4.1/lacZ/CAT is included for use as a positive control for transfection, expression, and detection in the cell line of choice.

pBudCE4.1 is an improved version of pBudCE4. During construction of the original vector, an ATG was inadvertently created in the multiple cloning site (672–674 bp) 3′to the CMV promoter. Since it may interfere with proper translation of the cloned gene, this ATG was changed to ATT to create pBudCE4.1.

质粒图谱

扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（请务必转化挑单克隆重提后使用）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl 无菌水溶解质粒；
②取2μl质粒加至100μl 感受态中，冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）

③加入500μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；

④取10μl、100μl复苏液，并分别涂布至目标质粒抗性的LB平板上；
（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）

⑤将平板正向培养1h，再倒置37度培养16h。如果要求是30度则培养20h；
（如果菌落过多，请将质粒稀释后再转化。如果无菌落，请加入10μl质粒离心全涂转化）

⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

2、甘油菌：四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。

3、穿刺菌：穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。

4、平板：直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒：单独提取的液体质粒收到后可直接使用。

生化试剂 pBudCE4.1-hrGFP哺乳双框质粒由上海钦胜生物科技有限公司为您提供，如想了解更多关于生物分子 pBudCE4.1-hrGFP哺乳双框质粒的报价、规格、厂家等信息，欢迎来电或留言咨询。除供应pBudCE4.1-hrGFP哺乳双框质粒外，上海钦胜生物科技有限公司还可为您提供：

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