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pCP-Cre大肠敲除质粒

pCP-Cre大肠敲除质粒

价格： ￥ 980

品牌：钦胜生物

供货周期： 现货

货号：QSP0330

规格：2UG

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pCP-Cre大肠敲除质粒

 

基本信息

 

原核抗性: 氯霉素Chl

克隆菌株: 大肠杆菌DH5α

培养条件: 30℃

 

质粒简介

        市面上没有见到可进行原核表达Cre酶的温敏质粒（温敏即意味着可以和pKD46一样进行质粒消除）。此质粒由pCP20改造而成，包含其Ori和Cm抗性基因。Cre基因由弱化的LacUV5启动子控制，于1mM ITPG诱导下过夜即可消除基因组中的抗性基因。（试管中长到OD600=0.6-0.8开始诱导，过夜后LB平板划线，挑单菌落验证抗性丢失）此质粒为低拷贝质粒，用试剂盒提质粒时，10ml菌液提质粒，过1个柱子，用50ul水收集，可以看到条带。普通通量的提质粒不易看到条带。

 

质粒图谱

 

 

扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒的抗性、感受态和培养温度。
        1、质粒干粉（请务必转化挑单克隆重提后使用）
        ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl 无菌水溶解质粒；
        ②取2μl质粒加至100μl 感受态中，冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）

        ③加入500μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；

        ④取10μl、100μl复苏液，并分别涂布至目标质粒抗性的LB平板上；
（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）

        ⑤将平板正向培养1h，再倒置37度培养16h。如果要求是30度则培养20h；
（如果菌落过多，请将质粒稀释后再转化。如果无菌落，请加入10μl质粒离心全涂转化）

        ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

        2、甘油菌：四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。

        3、穿刺菌：穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。

        4、平板：直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒：单独提取的液体质粒收到后可直接使用。

 

 





生化试剂 pCP-Cre大肠敲除质粒由上海钦胜生物科技有限公司为您提供，如想了解更多关于生物分子 pCP-Cre大肠敲除质粒的报价、规格、厂家等信息，欢迎来电或留言咨询。除供应pCP-Cre大肠敲除质粒外，上海钦胜生物科技有限公司还可为您提供：
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