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仪器信息网试剂标物生化试剂生物分子 pRSFDuet-1大肠双表达质粒

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上海钦胜生物科技有限公司

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pRSFDuet-1大肠双表达质粒

价格：￥ 980

品牌：钦胜生物

供货周期：现货

货号：QSP0051

型号：2UG

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pRSFDuet-1大肠双表达质粒

基本信息

启动子: T7/Lac

复制子: RSF ori

终止子: T7 terminator

质粒分类: 大肠系列质粒；大肠其它质粒；大肠双框质粒

质粒大小: 3829bp

质粒标签: N-6×His，C-S

原核抗性: 卡那青霉素Kan（50μg/ml）

克隆菌株: DH5α等大肠杆菌

培养条件: 37℃，有氧，LB

表达宿主: BL21(DE3)等大肠杆菌

培养条件: 37℃，有氧，LB

诱导方式: IPTG或乳糖及其类似物

5'测序引物: ACYCDuetUP1-F(GGATCTCGACGCTCTCCCT) DuetUP2-F( TTGTACACGGCCGCATAATC)

3'测序引物: DuetDOWN1-R( GATTATGCGGCCGTGTACAA) T7-ter-R( TGCTAGTTATTGCTCAGCGG)

备注: 同时表达两个外源蛋白

质粒简介

pRSFDuet-1质粒是一种原核表达载体， N端含有一个6×His标签，C端含有一个S标签。该质粒含有多个常用的酶切位点，便于不同基因克隆。表达由宿主细胞提供的T7 RNA聚合酶诱导，目的基因被克隆到质粒载体上，受噬菌体强转录及翻译信号控制。

该质粒还携带有RSF复制因子、lacI基因和氯霉素抗性基因。可以使这个pETDuet-1载体在一个适当的宿主菌株的coexpression 4目标基因插入MCS1的基因可以使用ACYCDuetUP1引物和DuetDOWN1引物进行测序。插入MCS2的基因可以用DuetUP2引物和T7进行排序。

pRSFDuet-1 is designed for the coexpression of two target ORFs. The vector contains two multiple cloning sites (MCS), each of which is preceded by a T7lac promoter and ribosome binding site (rbs). The vector also carries the RSF1030-derived RSF replicon, lacI gene and kanamycin resistance gene (KnR). This vector can be used in combination with pACYCDuet™-1 , pCDFDuet™-1 , and pETDuet™-1 in an appropriate host strain for the coexpression of 4 to 8 target proteins. ORFs inserted into MCS1 can be sequenced using the ACYCDuetUP1 Primer and DuetDOWN1 Primer . ORFs inserted into MCS2 can be sequenced using the DuetUP2 Primer and T7 Terminator Primer . Unique sites are shown on the circle map.

质粒图谱

扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（请务必转化挑单克隆重提后使用）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl 无菌水溶解质粒；
②取2μl质粒加至100μl 感受态中，冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）

③加入500μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；

④取10μl、100μl复苏液，并分别涂布至目标质粒抗性的LB平板上；
（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）

⑤将平板正向培养1h，再倒置37度培养16h。如果要求是30度则培养20h；
（如果菌落过多，请将质粒稀释后再转化。如果无菌落，请加入10μl质粒离心全涂转化）

⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

2、甘油菌：四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。

3、穿刺菌：穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。

4、平板：直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒：单独提取的液体质粒收到后可直接使用。

生化试剂 pRSFDuet-1大肠双表达质粒由上海钦胜生物科技有限公司为您提供，如想了解更多关于生物分子 pRSFDuet-1大肠双表达质粒的报价、规格、厂家等信息，欢迎来电或留言咨询。除供应pRSFDuet-1大肠双表达质粒外，上海钦胜生物科技有限公司还可为您提供：

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