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上海钦胜生物科技有限公司

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pET-41a大肠表达质粒

价格：￥ 980

品牌：钦胜生物

供货周期：现货

货号：QSP0038

规格：2UG

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pET-41a大肠表达质粒

基本信息

启动子: T7/lac

复制子: ColE1 ori，F1 ori

终止子: T7 terminator

质粒分类: 大肠杆菌载体；PET系列表达质粒

质粒大小: 5933bp

质粒标签: N-GST, N-6×His, N-Thrombin

原核抗性: 卡那霉素Kan

克隆菌株: DH5α

培养条件: 37℃，有氧，LB

表达宿主: BL21(DE3)

培养条件: 37℃，有氧，LB

诱导方式: IPTG或乳糖及其类似物

5'测序引物: T7:TAATACGACTCACTATAGGG

3'测序引物: T7-ter:TGCTAGTTATTGCTCAGCGG

质粒简介

pET41系列载体是设计用来克隆和高水平表达蛋白质的载体，载体融合表达一个含有220个氨基酸的GST标签蛋白纯化片段。pET41a载体的单一的多克隆位点见上面的环状质粒图谱。注意：载体序列是以pBR322质粒的编码规矩进行编码的，所以T7蛋白表达区在质粒图谱上面是反向的。

T7 RNA聚合酶启动的克隆和表达区域在质粒图谱中也被标注了出来。质粒的F1复制子是被定向的，所以在T7噬菌体聚合酶的作用下，包含有蛋白编码序列的病毒粒子能够产生，并启动蛋白表达，同时蛋白表达将被T7终止子序列的作用下终止蛋白翻译。pET-41a载体上面含有一个EK蛋白酶切位点，当将目的基因使用载体上面的PshAI限制性内切酶位点插入进去时，可以通过EK蛋白酶将载体上的融合的所有氨基酸序列包括GST标签序列，全部切除掉。

质粒图谱

扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（请务必转化挑单克隆重提后使用）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl 无菌水溶解质粒；
②取2μl质粒加至100μl 感受态中，冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）

③加入500μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；

④取10μl、100μl复苏液，并分别涂布至目标质粒抗性的LB平板上；
（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）

⑤将平板正向培养1h，再倒置37度培养16h。如果要求是30度则培养20h；
（如果菌落过多，请将质粒稀释后再转化。如果无菌落，请加入10μl质粒离心全涂转化）

⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

2、甘油菌：四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。

3、穿刺菌：穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。

4、平板：直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒：单独提取的液体质粒收到后可直接使用。

生化试剂 pET-41a大肠表达质粒由上海钦胜生物科技有限公司为您提供，如想了解更多关于生物分子 pET-41a大肠表达质粒的报价、规格、厂家等信息，欢迎来电或留言咨询。除供应pET-41a大肠表达质粒外，上海钦胜生物科技有限公司还可为您提供：

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