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仪器信息网试剂标物生化试剂生物分子 pTrcHisA大肠表达质粒

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上海钦胜生物科技有限公司

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pTrcHisA大肠表达质粒

价格：￥ 980

品牌：钦胜生物

供货周期：现货

货号：QSP0813

规格：2UG

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pTrcHisA大肠表达质粒

基本信息

启动子: Trc/lac

复制子: PBR322 ori

终止子: rrnB T2

质粒分类: 大肠杆菌载体；pTrc系列表达质粒

质粒大小: 4414bp

质粒标签: N-His，N-EK，N-Xpress

原核抗性: 氨苄青霉素Amp

克隆菌株: 大肠杆菌DH5α

培养条件: 37℃，有氧，LB

表达宿主: 大肠杆菌

培养条件: 37℃，有氧，LB

诱导方式: IPTG或乳糖及其类似物

5'测序引物: pTrcHis-F: GAGGTATATATTAATGTATCG

3'测序引物: pTrcHis-R:GATTTAATCTGTATCAGG

备注: pTrc表达质粒

质粒简介

pTrcHis载体是来由pBR322质粒衍生而来的表达载体,设计用来在大肠杆菌中进行重组蛋白的高效表达和纯化。载体上的Trc启动子和rrnB抗终止区使得高水平蛋白表达成为可能.Trc启动子由Trp启动子的-35区域和Lac启动子的-10区域共同组成。pTrcHis载体同时包含有一个LacIq基因，该基因编码了Lac启动子的抑制蛋白。LacIq基因的存在使得宿主菌是LacIq+还是LacIq-都可以高效抑制插入基因的转录。进行蛋白表达时，大肠杆菌需要生长到对数生长期，然后加入1mM IPTG，去除阻遏蛋白，诱导表达。载体上pTrcHis载体是来由pBR322质粒衍生而来的表达载体,设计用来在大肠杆菌中进行重组蛋白的高效表达和纯化。载体上的Trc启动子和rrnB抗终止区使得高水平蛋白表达成为可能.Trc启动子由Trp启动子的-35区域和Lac启动子的-10区域共同组成。pTrcHis载体同时包含有一个LacIq基因，该基因编码了Lac启动子的抑制蛋白。LacIq基因的存在使得宿主菌是LacIq+还是LacIq-都可以高效抑制插入基因的转录。进行蛋白表达时，大肠杆菌需要生长到对数生长期，然后加入1mM IPTG，去除阻遏蛋白，诱导表达。载体上的迷你顺反子结构能够增强插入基因的转录水平，从而高水平表达目的蛋白。DNA插入片段位于载体表达片段下游，在其上游有一个N-端融合表达多肽序列，该序列包含有ATG起始密码子，6xHis标签，T7噬菌体10号基因的翻译增强子，X press抗原表位，肠激酶酶切识别位点的迷你顺反子结构，能够增强插入基因的转录水平，从而高水平表达目的蛋白。DNA插入片段位于载体表达片段下游，在其上游有一个N-端融合表达多肽序列，该序列包含有ATG起始密码子，6xHis标签，T7噬菌体10号基因的翻译增强子，X press抗原表位，肠激酶酶切识别位点。

质粒图谱

扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（请务必转化挑单克隆重提后使用）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl 无菌水溶解质粒；
②取2μl质粒加至100μl 感受态中，冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）

③加入500μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；

④取10μl、100μl复苏液，并分别涂布至目标质粒抗性的LB平板上；
（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）

⑤将平板正向培养1h，再倒置37度培养16h。如果要求是30度则培养20h；
（如果菌落过多，请将质粒稀释后再转化。如果无菌落，请加入10μl质粒离心全涂转化）

⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

2、甘油菌：四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。

3、穿刺菌：穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。

4、平板：直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒：单独提取的液体质粒收到后可直接使用。

生化试剂 pTrcHisA大肠表达质粒由上海钦胜生物科技有限公司为您提供，如想了解更多关于生物分子 pTrcHisA大肠表达质粒的报价、规格、厂家等信息，欢迎来电或留言咨询。除供应pTrcHisA大肠表达质粒外，上海钦胜生物科技有限公司还可为您提供：

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