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获取电话pLKO-p53-shRNA-941人源基因干扰质粒
基本信息
启动子: U6 promoter
复制子: pUC ori,F1 ori,SV40 ori
终止子: cPPT/CTS , 3
质粒分类: RNA文库质粒；RNA人源质粒；shRNA人源质粒
质粒大小: 7083bp
原核抗性: Amp（100μg/ml）
筛选标记: Puro
克隆菌株: Stbl3
培养条件: 37℃，LB，有氧
表达宿主: 293T等哺乳细胞
培养条件: 37℃，5%CO2
诱导方式: 无需诱导
5'测序引物: U6-F（ATGGACTATCATATGCTTACCGTA）
3'测序引物: pLKO-R（CTGCACTGTACCCCCCAATC）
备注: P53序列：NM_000546。 P53-shRNA-941序列：CCGGCACCATCCACTACAACTACATCTCGAGAT GTAGTTGTAGTGGATGGTGTTTTT
质粒简介
pLKO-p53-shRNA-941质粒是在pLKO.1-Puro载体上克隆了一段shRNA序列得到的一个哺乳细胞慢病毒RNA干扰质粒。U6启动P53shRNA-941的转录，可特异性的干扰P53蛋白的表达。该质粒可作为普通过表达质粒直接转染哺乳细胞，也可包装成慢病毒侵染细胞。质粒本身带有Puro筛选标记，可用嘌呤霉素筛选转染后的细胞得到阳性克隆。
质粒图谱
扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（请务必转化挑单克隆重提后使用）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl 无菌水溶解质粒；
②取2μl质粒加至100μl 感受态中，冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入500μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；
④取10μl、100μl复苏液，并分别涂布至目标质粒抗性的LB平板上；
（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37度培养16h。如果要求是30度则培养20h；
（如果菌落过多，请将质粒稀释后再转化。如果无菌落，请加入10μl质粒离心全涂转化）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌：四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌：穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、平板：直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒：单独提取的液体质粒收到后可直接使用。