人肝窦内皮细胞永生化
人肝窦内皮细胞永生化细胞介绍
肝窦内皮细胞是肝脏非实质细胞中数目最多的细胞,约占肝非实质细胞总数的70%,在表型、功能上与普通毛细血管内皮细胞有较大差异。肝窦内皮细胞之间缺乏细胞间连接,细胞下基底膜物质很少,因此窦内皮通透性较高,有利于调节物质交换。
窗孔是肝窦内皮细胞最具特征性的结构,从<10nm至1~2μm不等,生理条件下由于窗孔结构的存在和缺乏内皮下完整基膜的结构,由肝窦内皮细胞构成的肝窦壁是全身毛细血管壁中唯一缺乏基膜的毛细血管,除窦内的血细胞外,血浆成分均能从窗孔进入Disse间隙,进行物质交换。
该细胞通过慢病毒转染的方式携带TERT基因。
人肝窦内皮细胞永生化细胞特性
1) 细胞来源于人正常肝组织。
2) 细胞鉴定:血管假性血友病因子(vWF)免疫荧光染色为阳性。
3) 经鉴定细胞纯度高于90%。
4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。
5) 细胞生长方式:上皮样,多角形细胞,贴壁培养。
英文名称:
传代方法:1:3~1:6传代
传代情况:P23
冻存条件:细胞冻存液
人肝窦内皮细胞永生化处理方法:
1. 细胞在培养瓶中培养至状态良好后灌满培养基运输,获得细胞后用酒精棉球擦拭瓶口消毒,然后在超净台中操作。
2. 如细胞生长至70%-80%,将瓶中的培养基移入无菌瓶中留作培养使用,保留5-8mL培养基在37℃、5%的CO2的温箱中继续培养。细胞培养至90%-100%后,按要求消化传代。
3. 弃去培养基,用无菌PBS或者其他缓冲液清洗细胞2次,加入适量胰蛋白酶消化(EDTA胰酶),待细胞完全脱壁后加培养基吹打混匀,分瓶培养。
特别注意:(如使用公共实验室或初次接触细胞培养,建议添加双抗培养)
1. 我们使用自产培养基及进口血清培养细胞,在您拿回细胞后,如想更换其它品牌培养基,请依照逐次替换的原则,先保留培养瓶中的培养基,多日多次代逐步更换,以减轻对细胞的刺激。
2. 如签收时出现培养瓶壁破裂,漏液等情况请及时拍照并联系售后。
3. 细胞任何售后问题,均需拍照存档并在2周之内及时联系客服。
实验中如何辨别细胞的污染?
细胞污染很多种,不bai同种细胞污染表现不du同,可能检测方法zhi不同。不过大部分污染用肉dao眼加镜检就可以解决。
细胞污染一般分细菌污染,真菌污染,支原体污染,黑胶虫等。
细菌污染:pH升高培养基变黄,培养基严重浑浊,镜下可见细菌游动;
真菌污染:培养液短期内多不浑浊,有肉眼可见漂浮物,镜下细胞间有菌丝体,生长变慢,时间长细胞死亡;
支原体污染:细胞生长一般无可见变化,可用支原体检测试剂盒检测支原体污染(现在市场上有卖,有检测支原体DNA的,灵敏度高但过程复杂;非检测DNA的过程简单)
黑胶虫:培养液不浑浊,细胞生长影响不大,镜下有小黑点做布朗运动;
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!