获取电话ROBO4试剂盒； 人交叉的同族体4检测试剂盒（ELISA方法）
产品名称：人交叉的同族体4(ROBO4) ELISA 试剂盒
产品编号：ZY-ROBO4-Hu
产品规格：96T/48T
实验方法：夹心法
检测范围：0.156-10ng/mL
最低检测限：0.050g/mL
保质期：12个月
ELISA试剂盒使用技巧：
1)仔细阅读说明书，熟悉整个流程，推荐画出简要步骤图；提前准备试剂。
2)样本的准备：尽量使用新鲜样本，不使用有溶血，被细菌污染、标本保存时间过长和标本凝固不全的样本。ELISA检测宜采集新鲜标本，如不能立即测定，5天之内应4℃保存，对于1周后检测的样本应低温冻存；做好分装，长时间冻存的样本避免反复冻融。
3)不同批次的试剂不要混用，检查各组分的有效期。
4)预包被的酶标板条和各试剂组份需要室温平衡30 min以上，这样做的目的能使反应微孔内的温度较快地达到所需温度，预防后续实验中由于孵育温度或是时间不够充分，而将一些弱阳性样本不能检出。
5)待测样本加样：待检样本过多时，建议分批操作；需要稀释的样本提前做好稀释，注意选对合适稀释液；控制好加样时间，避免加样费时过长造成误差；注意加样角度，垂直加入孔底，不要接触孔壁, 做到一份样本一个移液头，防止交叉污染。
6)温育和洗板：温育时间和温度一般根据试剂盒的说明书进行选择。温育时可以采用水浴或者湿盒孵育,避免“边缘效应”。①手工洗板时，拍板时要垂直，避免交叉污染，用力不能过猛，防止抗原抗体复合物脱离；②洗板机洗板时应经常检查冲洗头是否通畅。
7)显色：一般是以双组份（A：过氧化脲工作液，B液：TMB 工作液）为底物显色液。反应条件为37℃避光孵育15-30min
8)读数和数据分析：终止后读取结果尽量在15min内完成，读取OD值时酶标仪需先预热15～30 min再进行。数据分析一般用四参数和直线拟合法，选择哪种拟合方式，可以依据标曲的相关系数（R2）来确定，R2一般大于0.95可用。大于0.99是。
洗板时还应注意:
1.需每天校正注液量及残液量，洗涤后残液量不得大于2 μl。
2.及时更换破损吸液针，避免破坏底板包被。
3.针对不同厂家酶标板注意调整吸液头下降高度，避免冲洗针头卡住酶标板。
4.注意调整洗液量，洗液量过多将溢出，过少将达不到洗涤效果。
5.关机前使用蒸馏水冲洗管道，避免洗液的结晶物堵塞管道。
6.不同种试剂盒的洗液严禁混合使用。
ELISA试剂盒空白孔的设置:
1. 空气空白\水空白：一般是用于仪器调零的,所有孔数值减掉该孔数值。
2.底物空白：一般是用于防止底物弱显色所造成的读数偏高，同样所有孔数值减掉该孔数值（只加底物和终止液）
3. 酶空白：一般在2步法实验中使用，主要是看酶是否和板有非特异性结合的，一般不做这个 。
ELISA空白孔一般设一个，这是为了减除显色液的OD值。而阴性和阳性标准品一般是设2个复孔，虽然有点浪费，但为了确保实验的可靠性，我认为还是很有必要的。ELISA空白孔加什么？一般两个做法，看个人习惯或者说看你们实验室的习惯：
1，什么都不加，然后那个孔按照操作流程来做，这个说法的根据就是空白，也就是什么都没有。
2，加样本稀释液，然后按照操作流程来做。这个做法的根据就是只要不含阳性物质就算是空白的，加入样本稀释液的目的是为了使这个孔除了在没有阳性物质上其他的都与其他孔一致。
怎麽控制显色时间？
显色时间要通过预实验找到所测所有sample的显色OD在0.1到2.0的有效range间，我用过OPD solution，一般incubation for 15min at RT，测一次然后立即加入stop solution 在测一次。
ELISA试剂盒常见问题处理 | |||
出现问题 | 出现问题的原因 | 解决办法 | |
曲 线 | | 试剂盒未回温 | 试剂盒回温到25℃ |
温度控制不好 | 控制正确温度 | ||
孵育时间不准确 | 控制孵育时间 | ||
洗涤时冲击力太大、浸泡时间过长、洗涤次数增加 | 洗涤4-5次，每孔250ul，然后拍干 | ||
阳光直射，对着风直接吹 | 避风避光 | ||
酶标仪的波长错误 | 酶标仪的波长450nm | ||
抗体的稀释错误 | 正确的稀释抗体 | ||
水质问题 | 用娃哈哈矿泉水代替 | ||
| 洗涤液配制错误 | 正确的配制洗涤液 | |
少加液体（抗体、酶标记物、A液、B液） | 正确的步骤加液体 | ||
错加液体 | |||
| 标准品也污染 | 换标准品点板 | |
OD值不正常 | 控制温度时间在做一次 | ||
人为点板 | / | ||
线 性 不 好 | OD值不正常 | 控制温度时间在做一次 | |
人为点板 | / | ||
回 收 率 | | 样本本身就是阳性样本 | 换阴性样本做回收率 |
空白管在实验中被污染 | 实验中防止交叉污染 | ||
水质原因 | 用娃哈哈矿泉水代替 | ||
| 添加量不准确 | 准确的添加量 | |
添加浓度不适合 | 添加合适的浓度 | ||
取液吹干量多 | 准确的取液吹干 | ||
取到其它相层液体 | 取需用相吹干 | ||
复溶液未稀释或加入量少 | 正确的稀释复溶液 | ||
| 添加量不准确 | 准确的添加量 | |
添加浓度不适合 | 添加合适的浓度 | ||
取液吹干量少 | 准确的取液吹干 | ||
复溶液稀释错误或加入量多 | 正确的稀释复溶液 | ||
| 水质原因 | 点复溶液验证 | 用娃哈哈矿泉水代替 |
实验操作原因 | 吸取到其它相吹干 | 准确的取液吹干 | |
离心不彻底 | 延长离心时间 | ||
样本的污染 | 更换样本 | ||
乳化未处理完全 | 温浴（70℃）处理乳化现象 | ||
仪器试剂原因 | 离心管未清洗干净 | 正确的洗涤器具 | |
有机溶剂的影响 | 做试剂空白看影响结果 | ||
衍生化试剂原因（长时间衍生化试剂变质） | 更换衍生化试剂 | ||
与曲线好坏相关 | 保证曲线的正常 | ||
| 尿液pH偏碱性 | 用0.01M HCl调节尿液pH值到7.0左右。 | |
尿样滴加过多 | 重新测定，尿样按照说明书，控制在2滴 | ||
尿液过于混浊 | 将尿液离心后，取上清液重新测定 | ||
| 检测卡由于高温、受潮等原因失效 | 尿样需要重新检测。 | |
过了有效期失效。 | 该批号的金标应丢弃处理，尿液需要重新检测 | ||
操作过程中检测卡没有平放，导致液体样品直接冲过检测区 | 尿样需要重新检测，且检测卡平放于桌面上再加样。 | ||
尿液样品中含有较高的抑制或者干扰抗原抗体反应的物质（比如明矾、小苏打、氧化剂、肌酐等） | 该尿液的检测结果无效 | ||
金标卡上在除了T和C线之外的其他地方出线 | 金标卡上的划痕；胶体金在跑板过程中没有完全跑干净而遗留在卡上的痕迹； | 该检测卡结果不可信，尿液需要重新检测。 | |
实验重复性不好 | 操作人员的不一致，取样的不一致，样本数量的多少，加样时间的长短，洗涤条件不一致，加样量不一致 | 尽量保持的实验一致性 | |
分析软件的使用 | 不能设置和保存 | 正确的设置和保存 | |
如何判断曲线的好坏和分析结果 | 正确的判断曲线的好坏和分析结果 | ||
1.ELISA产品种类丰富：已上线3600种，有普通、高敏两个系列，覆盖15个研究领域；
2.样本量少：人、大鼠样本量需50uL，小鼠只需10uL；
3.操作时间短：最快2h完成孵育；
4.严格质控：精密度（板间、板内变异系数）准确度（回收率、稀释线性）样本值等8项质控指标检测；
5.发表的SCI文章数不胜数，影响因子可达15.84。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
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