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产品描述: 产品名称:无内毒素高纯度质粒小量快速提取试剂盒 描述: 本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞,粗提物通过过滤柱除去内毒素,然后离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA,再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除,最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。
使用方法: 提示: 1、第一次使用前请先在漂洗液 WB 瓶中加入指定量无水乙醇,充分混匀,加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇,以免多次加入! 2、将 RNase A 全部加入溶液 P1 中,混匀,每次使用后置于 2-8℃保存。 操作: 1、向吸附柱AC 中(吸附柱放入收集管中)加 500μl 的平衡液 BL,12,000rpm 离心 1min, 倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。 2、取 1.5-4.5 毫升过夜培养的菌液 12,000rpm 离心 30sec,尽可能的倒干上清,收集菌体。 3、用 250μl 溶液 P1 重悬菌体沉淀,涡旋振荡至彻底悬浮。 4、加 250μl 溶液 P2,温和地上下翻转 4 -7 次(裂解时间不超过 5min)使菌体充分裂解。 5、加 350μl 溶液 P3,立即温和地上下翻转 4 -7 次,充分混匀,此时会出现白色絮状沉 淀,12,000rpm 离心 5 min。 6、将上清加入到过滤柱E中(过滤柱放入 1.5ml或2ml离心管中),12,000rpm离心2 min, 收集液体。如上清量较大,请分两次离心。 7、将上述液体转入吸附柱 AC 中(吸附柱放入收集管中),12,000rpm 离心 30-60 sec, 倒掉管中的废液。 可选步骤: 所用菌株为 JM 系列、HB101 等 endA 菌株或野生型菌株时,由于核酸酶 含量丰富, 应加入 500μl 去蛋白液 PD,12,000rpm 离心 30-60 sec,弃废液。 8、加入 500μl 漂洗液 WB(请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000rpm 离心 30-60 sec 弃掉废液。 9、重复步骤 8。 10、将吸附柱 AC 放回空收集管中,12,000rpm 离心 2 min,将吸附柱置于室温放置数 min,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。 11、取出吸附柱 AC,放入一个干净的离心管中,室温放几分钟。 12、在吸附膜的中间部位加 50μl-100μl 洗脱缓冲液 EB(洗脱缓冲液事先在 65-70℃水浴 中加热效果更好),室温放置 2 min,12,000rpm 离心 1 min。如果需要较多量质粒, 可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,离心 1 min。(注意:若用 ddH2O 做洗脱液, 应保证其 pH 值在 7.0-8.5 范围内,pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率。洗脱缓冲液体 积不应少于 50 μl,体积过 小影响回收效率。且 DNA 产物应保存在-20℃,以防 DNA 降解。) 储存/保存方法: 参考试剂盒说明书,有效期18个月。 注意事项: 1、第一次使用时,将试剂盒所带的全部 RNase A 加入溶液 P1 后(终浓度 100ug/ml) 置于 4℃保存。如果溶液 P1 中 RNase A 失活,提取的质粒可能会有微量 RNA 残留, 在溶液 P1 中补加 RNase A 即可。
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