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产品描述: 产品名称:组织/细胞基因组DNA快速提取试剂盒 描述: 独特的结合液/蛋白酶K迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶,然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除,最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。
使用方法: 提示: 第一次使用前请先在漂洗液 WB 中加入指定量无水乙醇,充分混匀,加入 后请及时在方框打钩标记已加入乙醇,以免多次加入! 如果需要去除 RNA,可在加蛋白酶 K 溶液前先加入 4μl RNaseA(10mg/ml)溶液 ,振荡 15sec,室温放置 5 min。 1、组织培养细胞 a、收集约 10 5-10 6悬浮细胞到一个 1.5ml 离心管;对于贴壁细胞,应该先用胰蛋 白酶消化后吹打下来收集。 b、12,000rpm 离心 10 sec,使细胞沉淀下来。弃上清,留下细胞团和大约 10-20μl 残留的液体。 c、加 200μl 1×PBS 重悬洗涤细胞,12,000rpm 离心 10 sec,使细胞沉淀下来。弃 上清, 将细胞沉淀重悬于 180μl 1XPBS 中。 d、加入 20μl 蛋白酶 K (20mg/ml)溶液,充分混匀(可选步骤:为清除 RNA,加 入 5μl RNase A(10mg/ml),振荡混匀,可选择室温放置 5min),再加入 200μl 结合液 CB,立刻涡旋振荡充分混匀,在 70℃放置 10 min。 e、冷却后入 200μl 无水乙醇,立刻涡旋振荡充分混匀,此时可能会出现絮状沉 淀。 f、将上一步混合物(包括可能有的沉淀)加入吸附柱 AC 中,(吸附柱放入收集 管中)12,000rpm 离心 1 min,倒掉收集管中的废液。 g、按操作步骤 4 继续后续的实验。 2、动植物组织(例如鼠肝脑或者植物叶片) a、新鲜或者解冻的组织在液氮中研磨成细粉后或者用解剖刀切成小碎块(切成 微块可以提高产量)后取 20-50mg,转入装有 180μl 组织裂解液 TL 的 1.5ml 离心 管中, 用大口径枪头吹打混匀。 b、加入 20μl 的蛋白酶 K 溶液(20mg/ml),立刻涡旋振荡充分混匀。 c、将裂解物放置在 55℃水浴 1-3 小时或者直到组织消化完全,期间轻柔的振荡 几次帮助裂解。为清除 RNA,加入 5μl RNase A(10mg/ml),振荡混匀(可选择室温放置 5 min)。 d、加入 200μl 结合液 CB,立刻涡旋振荡充分混匀,70℃放置 10 min。 e、冷却后加入 200μl 无水乙醇,立刻涡旋振荡充分混匀,此时可能会出现絮状 沉淀。 f、用 1ml 的枪头吸取混合物,将混合物加入一个吸附柱 AC 中,(吸附柱放入收 集管中)12,000rpm 离心 1 min,倒掉收集管中的废液。 g、按操作步骤 4 继续后续的实验。 3、动物组织(鼠尾) a、将 0.2-0.5cm 的鼠尾巴尖(即 20-50mg)剪碎(一定要剪 0-2cm 范围内的尾巴尖, 否则裂解效果不好),或者在液氮中研磨组织成细粉后,转入装有 180μl 组织裂解 液 TL 的 1.5ml 离心管中, 用大口径枪头吹打混匀。 b、加入 20μl 的蛋白酶 K(20mg/ml),立刻涡旋振荡充分混匀。 c、将裂解物放置在 55℃水浴 3 小时或者直到组织消化完全,期间轻柔的振荡几次 帮助裂解。为清除 RNA,加入 5μl RNase A(10mg/ml),振荡混匀(可选择室温 放置 5 min)。 d、用一个 1ml 不带针头的一次性输液器抽打裂解物 2-3 次。 e、加入 200μl 结合液 CB 和 200μl 无水乙醇,立刻涡旋振荡充分混匀。 f、12,000rpm 离心 5 min,将上清加入一个吸附柱 AC 中,(吸附柱放入收集管中) 12,000rpm 离心 30-60 sec,倒掉收集管中的废液。 g、按操作步骤 4 继续后续的实验。 4、加入 500μl 抑制物去除液 IR,12,000rpm 离心 30 sec,弃废液。 5、加入 500μl 漂洗液 WB(请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000rpm 离心 30 sec, 弃掉废液。 6、重复操作步骤 5。 7、将吸附柱 AC 放回空收集管中,12,000rpm 离心 2 min,将吸附柱置于室温放置数分 钟,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。 8、取出吸附柱 AC,放入一个干净的离心管中,在吸附膜的中间部位加 50-100 洗脱缓 冲液 EB(洗脱缓冲液事先在 65℃水浴中预热效果更好),室温放置 3-5 min,12,000rpm 离心 1 min。为了增加基因组 DNA 的得率,将得到的溶液重新加入离心吸附柱中, 室温放置 2 min,12,000rpm 离心 1 min。(注意: DNA 产物应保存在-20℃,以防 DNA 降解。) 储存/保存方法: 室温保存,有效期12个月。 注意事项: 1、结合液 CB 或者抑制物去除液 IR 低温时可能出现析出和沉淀,可以在 37℃水浴几分 钟帮助重新溶解,恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
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