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产品描述： 产品名称：BCIP/NBT碱性磷酸酶显色试剂盒 描述: BCIP/NBT碱性磷酸酯酶显色试剂盒(BCIP/NBT?Alkaline?Phosphatase?Color?Development?Kit)是一种用于免疫组化显色、Western等膜显色和诱导多功能干细胞iPS鉴定等的试剂盒。BCIP/NBT是碱性磷酸酯酶的常用底物，在碱性磷酸酯酶的催化下，BCIP会被水解产生强反应性的产物，该产物会和NBT发生反应，形成不溶性的深蓝色至蓝紫色的NBT-formazan。 组分
别名: BCIP/NBT Alkaline Phosphatase Color Development Kit 应用: 用于免疫组化显色、Western等膜显色和诱导多功能干细胞iPS的鉴定等。 使用方法: BCIP溶液(100×)：置于室温下平衡5分钟，摇匀混合，若出现浑浊或析出，属于正常现象，因其中BCIP溶液的浓度过高所致。吹打混匀后，取出相应的量进行实验即可。 NBT溶液(150×)：置于室温下平衡5分钟，摇匀混合，若出现浑浊或析出，属于正常现象，因其中BCIP溶液的浓度过高所致。吹打混匀后，取出相应的量进行实验即可。 1、将凝胶转染至膜上后，用表1所列的洗液洗膜5min 表1 通用的洗液及封闭液 洗液 封闭液 1 1×TBS (20 mM Tris-HCl, pH 7.5，0.9% 氯化钠) 洗液+ 0.5% TWEEN 20 2 1×TBS + 0.05% TWEEN 20 洗液+1~5% BSA 3 1×TBS + 0.05% TWEEN 20 洗液+2~4% 脱脂奶粉 注：1为宽松的条件；3为最严格的条件。推荐使用洗液3和封闭液3（洗液+2% 脱脂奶粉）。 2、在室温下，用封闭液稀释一抗后，与膜孵育2h，期间轻轻摇晃。按照一抗的使用说明书对一抗进行稀释。 3、用洗液洗膜5min。 4、在室温下，用封闭液稀释的二抗（与碱性磷酸酶偶联的二抗）与膜孵育2h，轻轻摇晃。按照二抗使用说明书进行稀释，或用封闭液将二抗稀释1000倍后使用。 5、用洗液洗膜3次，每次5min。 6、在洗膜期间，按照如下比例依次加入各溶液，混匀后即配制成BCIP/NBT染色工作液： 碱性磷酸酯酶显色缓冲液 2.95mL 9.833mL BCIP溶液(100×) 30μL 100μL NBT溶液(150×) 20μL 67μL BCIP/NBT染色工作液 3mL 10mL 7、最后一次洗涤完毕后，去除洗液，加入适量BCIP/NBT染色工作液，确保能充分覆盖样品。 8、室温避光孵育1~5min，直至显色至预期深浅。 9、去除BCIP/NBT染色工作液，用蒸馏水洗涤1-2次即可终止显色反应，或用1%冰乙酸漂洗终止反应。 分析及解决 1、背景颜色过深 加入一抗之前，进行封闭。与样本相同来源的正常血清（10%），作为二抗，会得到最佳的效果； 在免疫印迹中加入的封闭剂，例如10% BSA， 0.05% TWEEN 20，3%脱脂奶粉。当使用avidin-biotin系统时，不要使用脱脂奶粉封闭； 减少染色时间； 用滴定法，确定最佳的工作液的稀释倍数。 2、未显色或显色模糊 调整一抗浓度； 调整二抗浓度； 确定酶的偶联是否有活性； 考虑使用放大系统，例如avidin-biotin； 增加染色时间； 调整样本转染至膜上的时间； 增加样本使用量。 储存/保存方法: 2~8℃避光保存，有效期1年 注意事项: 1、为了您的自身安全，使用试剂前，请做好防护，如穿实验服，带手套等。 2、BCIP对人体有刺激性，NBT对人体有害，请注意适当防护。 3、使用BCIP及NBT之前请离心，避免因液体挂壁而造成的损失。
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