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产品描述： 产品名称：苏木素-伊红(HE)染色试剂盒 描述: 苏木素染液综合了多种经典的方法配制而成。该溶液无汞，可用于免疫组化复染和 H＆E 染色。 组分： A：苏木素染液 100ml B：伊红染液 100ml
使用方法: 实验流程： 冰冻切片后，各种步骤（干燥，乙醇或甲醇固定，热固定，使用带电的或有粘性的盖片）保 证组织切片在染色过程中不脱落。 1.95%乙醇：在 HE 染色开始前，组织切片需要固定并水化。将切片置于 95%乙醇中约 2min， 开始水化并固定组织。 注意：跳过使用 95%乙醇对组织进行水化和固定，并不影响形态学上的细节。合理的解释 为第二步将为水化提供足够的水。 2.水化：进一步对组织切片进行水化 3~5min，并冲掉前一步残留的乙醇。 注意：与第一步相似，跳过水化对于组织染色的质量非常小。 3.苏木素：水化后，组织切片用苏木素染色 1~3min，可根据染色结果和要求调整染色时间。 苏木素是一种基本染料，可以对细胞的酸性成分进行染色，包括核酸、粘多糖、酸性糖蛋白， 将他们染成蓝-紫色。 注意：没有苏木素，伊红会将组织染成亮粉红色；显而易见的是缺乏细胞核。组织结构很难 区分，细胞内成分几乎都不存在，难以辨别。 4.水洗：苏木素染色后，用水洗组织是非常重要的。这一步以及随后的水洗，可将多余的 染料，媒染剂等去除。适当的漂洗可以去除表面金属光泽，金属光泽可阻止苏木素的染色。 注意：跳过此步，将产生不好的结果，例如沉淀的形成，染液的稀释，表面金属光泽的存在。 5.酸酒精：酸酒精分色剂 3~5sec。在苏木素染色方法中，组织切片有意过度染色，酸酒精 将去除多余的染料以及玻片上的背景染色。 注意：如果没有此步骤，组织切片将变为暗紫色。嗜酸结构，例如，胶原，将不会呈现明亮 的粉红色。组织结构之间将很难区分。很难对切片做出正确的判断。 分色过度可能是由于： 1)酸浓度过高； 2)脱色时间过长等。 分色不足是由于： 1)酸浓度过低； 2)脱色时间不足； 3)在切片上有多余的蛋白或者明胶等。 6.水洗：水洗 30sec，终止酸酒精反应，进一步阻止酸酒精从组织切片上将大量苏木素去除。 注意：如果切片没有经过漂洗，酸酒精可以过度脱色。如果不去除脱色剂，酸酒精将持续从 组织切片上去除苏木素。 7.自来水冲洗或用蓝化液蓝化：自来水冲洗 3~5min，可起到发蓝处理，将紫红色的苏木素 转变为蓝紫色。通常，发蓝试剂是 pH 依赖性的，由碱性溶液构成。因此，如果自来水作为 发蓝试剂，pH 值的每天监控是非常重要的，因为自来水的 pH 值可能每天都会波动。 或用蓝化液蓝化，30sec~1min；流动的自来水冲洗 5min； 注意：跳过发蓝试剂步骤，将会导致苏木素染液的颜色发生微妙的变化，难以区分。代替深 蓝色，细胞核将呈现紫色，有时甚至是红色。细胞核不可过度蓝染。如果组织染色过蓝，一 般是在组织切片上苏木素过多所致。 8.水洗：为伊红复染做准备，通过水洗 30sec，将多余的发蓝试剂去除。因为在碱性环境下， 伊红无法染色，水洗去除发蓝试剂将允许伊红保持其酸性 pH 值，使伊红得以均匀复染。 注意：发蓝试剂之后，如果没有水洗，组织切片无法正确使用伊红染色。因此，酸性结构将 被染为苍白色并且不均匀，进而导致错误的判断。 9.伊红：为了正确区分胞内结构，伊红是出色的苏木素复染剂。伊红复染 30~60sec，可根 据染色结果和要求调整染色时间。伊红是酸性染料，可染细胞质，尤其是线粒体、分泌颗粒 和胶原。它可以区分细胞内不同的细胞器以及不同的结缔组织。 注意：使用伊红复染组织切片的失败，将导致组织切片的低分化。 染色较弱是由于： 1）组织切片过薄； 2）染色时间不足； 3）随后 95%酒精分化过度。 染色过度是由于： 1）染液浓度较高（可能是由于过度蒸发）； 2）组织切片过厚； 3）染色时 间过长； 4）随后 95%酒精分化不足。 伊红染色未分化（一种颜色）是由于： 1）固定不彻底； 2）过度染色，a）染色时间过长；b）染液浓度过高。 10.95%乙醇：95%乙醇处理 2 s~1 min，根据染色结果和要求调整；伊红分化将产生不同的 粉色。 注意：如果 95%乙醇被稀释（例如，从前一步染色中携带了伊红），分化的效果较差。 11.100%乙醇：通过 100%乙醇使组织切片脱色。100%乙醇处理 1 min；再用新的 100%乙醇 处理 1 min。 注意：这一步很难引起注意，若无 95%乙醇，难以区分酸性结构，组织切片成为粉色。若 无 100%乙醇脱水，组织切片不能完全脱水，导致在盖片下形成水珠。这些水珠可与下一步 的二甲苯结合而形成白色混浊物，这将影响组织切片的质量。 12.二甲苯：二甲苯处理 5min。在充分脱水后，二甲苯可将组织切片上的酒精去除。去除酒 精后，在载玻片上加盖玻片时，二甲苯也可作为包埋剂确保可溶解。由于有潜在的毒性，二 甲苯替代品，例如柠檬烯、环烷烃也可使用。替代品可提供相同的组织染色质量，并且他们 使用更安全，操作更简单。 注意：当跳过此步骤时，不使用二甲苯透明，酒精将会保存于组织切片上，导致伊红从切片 上流出。 13. 封片：中性树胶封片，自然风干或烤干，显微镜观察。 储存/保存方法: 避光储存于室温，有效期12个月。 注意事项: HE 染色是一个对经验要求非常高的染色，实验流程中所提供的染色时间都是参考时间，要根据实验原理，结合具体情况而定。
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