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Cas9稳定表达的人恶性黑色素瘤细胞；A375-Cas9-574厂家

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品牌：ATCC

供货周期：现货

货号：CS-X6683

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细胞培养操作规程：

Cas9稳定表达的人恶性黑色素瘤细胞；A375-Cas9-574厂家主要功能：

（1）血管平滑肌细胞的再生能力是原发血管病变的重要因素。

（2）表达钙通道及ICAM-1和VCAM-1，参与血管壁的炎症反应。

（3）与血管疾病的进展和稳定有关。

生理变化：

（1）主动脉硬化。

（2）主动脉瘤

（3）主动脉钙化。

一般培养方法:

1、组织块培养法

A）按照前述方法取材，将组织剪成或切成1mm3大小的小块，并加入少许培养基使组织湿润。

B）将小块均匀涂布于瓶壁，每小块间距0.2 cm～12.5px，一般在25mL培养瓶（底面积为437.5px2）可接种20～30小块为宜，小块放置后，轻轻翻转培养瓶，使瓶底朝上，然后于瓶内加入适量培养基盖好瓶塞，将瓶倾斜放置在37℃温箱内。

C）培养2～4小时，待小块贴附后，将培养瓶缓慢翻转平放，静置培养，动作要轻，严禁摇动和来回振荡，以防由于冲动而使小块漂起而造成培养失败，若组织块不易贴壁可预先在瓶壁涂一薄层血清、胎汁或鼠尾胶原等。开始培养时培养基不宜多，以保持组织块湿润即可，培养24小时后再补液，培养初期移动和观察时要轻拿轻放，开始几天尽量不去搬动，以利贴壁和生长，培养3～5天时可换液，一方面补充营养，一方面去除代谢产物和漂浮小块所产生的毒性作用。

2、消化培养法

该方法是采用前述的消化分散法，将妨碍细胞生长的细胞间质（包括基质、纤维等）去除，使细胞分散形成细胞悬液，然后分瓶培养。

3、悬浮细胞培养法

对于悬浮生长的细胞，如白血病细胞、淋巴细胞、骨髓细胞、胸水和腹水中的癌细胞和免疫细胞无需消化，可采用低速离心分离，直接培养，或经淋巴细胞分层液分离后接种培养。

细胞名称 Cas9稳定表达的人恶性黑色素瘤细胞；A375-Cas9-574

形态特性上皮样　

生长特性贴壁生长　

特征特性该细胞是采用慢病毒感染的方式使A375细胞稳定表达Cas9-Flag-Neo，经400ug/mlG418筛选得到的单克隆，经Western Blotting验证该克隆可以表达Cas9蛋白，可直接用Crispr技术编辑基因组DNA。

培养条件 DMEM-H: Dulbecco＇s Modified Eagle＇s Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS；1mM丙酮酸钠+4mML-Glutamine；400ug/ml G418

传代方法 1:3~1:8传代；2~3天换液1次。

传代情况 C3

冻存条件基础培养基+5%DMSO+20%FBS　　

产品名称	Cas9稳定表达的人恶性黑色素瘤细胞；A375-Cas9-574厂家
生长特性	贴壁生长
货号	CS-X6683

Cas9稳定表达的人恶性黑色素瘤细胞；A375-Cas9-574厂家运输保存：采用干冰保存运输。收到细胞时，若干冰已经完全融化，请立即将细胞复苏培养；

若尚留有干冰，请立即将细胞放入液氮中保存待用，请按指定条件贮存细胞，切不可将细胞置于高温环境。

培养操作：

1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入 4mL 培养基混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；

1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆脱落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻存管做好标识。

3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取
CEP95 英文名称：中心体蛋白95抗体 0.1ml

Anti-Phospho-HER3 (Tyr1197) 磷酸化HER3受体抗体Multi-class antibodies规格： 0.1ml

MCP-3/CCL7(Human monocyte chemotactic protein 3) ELISA kit 人单核细胞趋化蛋白3Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-Glycodelin A/PP14 胎盘蛋白14抗体Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Mouse Anti-Bov IgG/Cy7 Cy7标记的小鼠抗IgG 规格 0.1ml

Tn-T(Human Troponin T) ELISA Kit 人肌钙蛋白T 96T

RNF157 英文名称：环指蛋白157抗体 0.2ml
Cas9稳定表达的人恶性黑色素瘤细胞；A375-Cas9-574厂家Anti-AATK AATK细胞凋亡关联酪氨酸激酶抗体Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-c-Jun(Thr249) 磷酸化原癌基因c-Jun抗体规格 0.1ml

兔抗BSA 0.5ml 国产

WDR26 英文名称：心肌缺血预处理正调节蛋白2抗体 0.2ml

DP-II 英文名称：桥粒斑蛋白2抗体 0.2ml

Anti-AATK AATK细胞凋亡关联酪氨酸激酶抗体Multi-class antibodies规格： 0.2ml

EGFR 英文名称：表皮生长因子受体抗体 0.1ml

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